JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:34 dk. • May 29th, 2025
Düzleştirilmiş beyin kortikal bölümlerinin önceden sabitlenmiş teğetsel bölümleriyle başlayın. Fiksatif izleri gidermek için yıkayın.
Bölümleri bir diaminobenzidin veya DAB çözeltisi ve nikel-amonyum sülfat ile boyayın.
DAB kortikal nöronlara yayılır ve mitokondrideki sitokrom oksidaz ile reaksiyona girerek koyu renkli bir çökelti oluşturur. Nikel-amonyum sülfat çökeltiyi koyulaştırarak kontrastı arttırır.
Lekelenme reaksiyonunu durdurmak için paraformaldehit ekleyin, ardından durulayın.
Bölümleri bir slayt üzerine monte edin ve etanol yıkamaları ile kurutun.
Bölümü temizlemek ve ışık iletimini iyileştirmek için izopropanol ve ksilen ile durulayın.
Bir montaj ortamı uygulayın ve üzerine bir lamel koyun.
Parlak alan mikroskobu altında, kortikal nöronlar içinde görüntülendiğinde, çökeltiler ışığı emer ve saçar, bu da karanlık görünmelerini sağlar.
Buna karşılık, lekelenmemiş, temizlenmiş alanlar ışığı iletir ve parlak görünür.
Bu kontrast, kortikal modülleri, duyusal bilgilerin işlenmesinde yer alan aktif nöral kümeleri temsil eden, daha açık bir arka plana karşı koyu, yamalı yapılar olarak vurgular.
Kesit dokusunu HEPES tamponunda 15 dakika boyunca hafif çalkalayarak yıkayın. Yıkama sır
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin