JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:38 dk. • May 29th, 2025
Fare siyatik sinirlerinden ve dorsal kök gangliyonlarından veya DRG'lerinden izole edilmiş hücreleri alın.
Bağışıklık hücrelerini etiketlemek için CD45 ve CD11b'ye karşı florofor etiketli antikorlarla ve MHC sınıf II'ye karşı biyotin etiketli antikorlarla inkübe edin.
Biotin'e bağlanan florofor etiketli streptavidin ile inkübe edin.
Hücresel yapıyı stabilize etmek için bir fiksatif ile tedavi edin.
Membranları geçirgen hale getirmek ve çekirdekleri etiketlemek için floresan DNA boyası ile bir geçirgenlik tamponu ekleyin.
Bir akış sitometresi kullanarak, optik ve floresan özelliklerini değerlendirmek için hücreleri lazer ışınından geçirin.
Tek hücreleri izole etmek ve işaretleyicilerden floresanı tespit etmek için daha yüksek DNA floresansına sahip agregaları çıkarın.
Bağışıklık hücrelerinin karakteristik bir belirteci olan CD45'i eksprese eden hücreleri tanımlayın ve varlıklarını doğrulayın.
DRG'deki çoğu CD45 pozitif hücre, siyatik sinirlerde bulunmayan mikroglia benzeri hücreleri gösteren CD11b ve MHC sınıf II'yi eksprese eder.
Bu teknik, sinir dokuları içindeki bağışıklık hücresi heterojenliğini analiz etmek için görüntülemeyi tamamlar.
Bilgisayarda, ilgilenilen floroforların tespiti iç
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin