JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:59 dk • May 29th, 2025
Nöronların ve radyal glial hücrelerin floresan proteinleri eksprese ettiği ve görselleştirmelerini sağladığı, dönüştürülmüş fare embriyonik organotipik beyin dilimlerini içeren bir zar eki alın.
Floresan mikroskobu kullanarak, sağlam radyal glial iskeleler kullanarak dilimin piyal yüzeyine radyal olarak göç eden floresan kortikal nöronlara sahip bir dilim seçin.
Görüntüleme sırasında hücresel aktiviteyi desteklemek için seçilen dilimle birlikte membran ekini ortamlı cam tabanlı bir tabağa aktarın.
Hücre canlılığını sağlamak için çanağı ters konfokal mikroskobun iklim kontrollü odasına yerleştirin.
Foto hasarını en aza indirirken net görüntüler yakalamak için görüntüleme parametrelerini ayarlayın.
Ardından, hücresel yapıları görselleştirmek için hedeflenen bölgede bir Z yığını yapılandırın.
Düzenli aralıklarla hızlandırılmış görüntülemeyi başlatın.
Kortikal nöronların subventriküler bölgeden radyal glial iskeleler boyunca kortikal plakaya doğru radyal göçünü değerlendirmek için görüntüleri analiz edin ve nöronal göç modellerini vurgulayın.
Dilimleri ters çevrilmiş bir mikroskopla görüntüleyerek görüntüleme için bir beyin dilimi seçin. Üst SVZ'de, dilimin pial yüzeyine radyal olarak göç eden parlak tek nöronlara sahip bir dilim seçin.
Tüm kortikal plakayı kaplayan radyal glial hücrelerin ince floresan işlemlerinin varlığı, göç eden kortikal nöronlar tarafından kullanılan sağlam bir radyal glial iskeleyi gösterir.
Seçilen bir dilim ile membran ekini 2 mililitre dilim kültür ortamı içeren 50 milimetre çapında bir cam tabanlı kaba aktarın. Çanağı konfokal mikroskobun iklim odasına yerleştirin.
Çözünürlüğü 512 x 512 piksel olarak ayarlayın. Kare hızını saniyede yaklaşık 1,4 kareden yaklaşık 2,5 kareye çıkarmak için tarama hızını 400 hertz'den 700 hertz'e yükseltin. Ortalama olarak en fazla iki kez kullanın.
Elektroporasyonlu bölge boyunca 1,5 mikronluk bir adım boyutuna sahip bir Z-yığını tanımlayın. Her 30 dakikada bir Z-yığını alarak zaman atlamalı serisini başlatın. Açıklanan ayarlar, çekim sırasında foto hasarı düşük tutarken görüntünün yeterli çözünürlüğüne ve parlaklığına izin verir.