Atomik Kuvvet Mikroskobu Kullanılarak Bir Fare Beyninden İzole Edilen Polizomların Görüntülenmesi

Fare beyin dokusundan izole edilmiş yapışmış polizomlara sahip bir mika tabakası ile başlayın.

Bir polizom, bir RNA zincirine bağlı çoklu ribozomlardan oluşan bir komplekstir.

Bant kullanarak mika tabakasını numune tutucuya sabitleyin.

Numune tutucuyu atomik kuvvet mikroskobu aşamasına yerleştirin.

Önceden monte edilmiş konsolu yerleştirin. Görüntüleme sırasında doğru sinyal algılamayı sağlamak için lazeri ve dedektörü hizalayın.

Numune bütünlüğünü korurken yüzey özelliklerinin algılanmasını optimize etmek için konsolun salınım frekansını ayarlayın.

Konsol ucunu numune yüzeyi üzerinde salarak görüntülemeye başlayın. Uç

, polizomun yükseltilmiş bir yüzeyiyle karşılaştığında, lazer saptırılır.

Lazerin bu sapmaları, nano ölçekli çözünürlüğe sahip bir görüntü oluşturan dedektör tarafından yakalanır.

Rastgele eğilme ve sürüklenme efektlerini düzeltmek için uygun yazılımı kullanın ve polizomun görselleştirilmesini sağlayın.

Hazırlanan numuneyi çift taraflı bant kullanarak AFM'nin numune tutucusuna takın. Ardından, numune tutucuyu üreticinin talimatlarına uygun olarak AFM aşamasına yerleştirin. Kalibrasyonu takiben, konsol ucu yüzeye temas edene kadar numuneye yaklaşın.

2 x 2 mikronluk bir tarama alanı, en az 512 x 512 piksel çözünürlük seçin. Canlı arka plan çıkarma modunu seçin ve 20 ila 25 nanometre arasında bir Z ölçeği seçin. Ardından, görüntü alımına başlayın. Havada görüntü alırken 10 ila 15 nanometre arasında bir yükseklik ile karakterize edilen yuvarlak nesnelerin varlığını arayarak görüntüyü inceleyin.

Ardından, keskin nesneler görselleştirilene kadar ayar noktasını ve geri besleme parametrelerini ayarlayın. Arka plan, 2 ila 4 nanometre yüksekliğinde nesneler içeren iyi örneklerde nispeten düz görünmelidir. Görüntü iyi göründüğünde, farklı numune alanlarında 2'ye 2 mikronluk birkaç tarama yapın.