JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:16 dk. • May 29th, 2025
Bir sıçan yavrusu beyninden izole edilen ve oligodendrositlere farklılaşmak için indüklenmiş bir oligodendrosit öncü hücre (OPC) kültürünü ele alalım. Hücreler, hücresel mimariyi korumak için sabitlenir.
Diferansiye oligodendrositler, olgun oligodendrositlerin bir belirteci olan miyelin bazik proteinini veya MBP'yi eksprese ederken, hem OPC'ler hem de farklılaşmış hücreler oligodendrosit transkripsiyon faktörü 2'yi veya Olig2'yi eksprese eder.
Bir geçirgenlik bloke edici çözelti uygulayın ve çalkalama ile inkübe edin, hücresel zarları geçirgen hale getirin ve spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke edin.
Belirteçleri hedefleyen birincil antikorları ekleyin ve bağlanmaya izin vermek için çalkalama ile inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın, daha sonra birincil antikorlara özgü farklı florofor konjuge ikincil antikorları ekleyin ve ajitasyon ile inkübe edin.
Hücreleri yıkayın, ardından çift floresan görüntüleme sistemine yerleştirin.
Farklı floroforları uyarmak için belirli dalga boylarındaki ışığı kullanın ve işaretçileri görselleştirmek için yayılan sinyalleri tespit edin.
Sadece olig2 ifade eden farklılaşmamış OPC'ler arasında olig2 ve MBP'yi ifade eden farklılaş
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin