Nöronal Mitokondrinin Seri Blok Yüz Taramalı Elektron Mikroskobu Kullanılarak Görüntülenmesi

Hipokampusu içeren kesilmiş, reçineye gömülü bir fare beyin dokusu bölümü alın. Bölüm,

elektron mikroskobu altında kontrastı artırmak için ağır metallerle boyanmıştır.

Siyanoakrilat yapıştırıcı kullanarak bölümü bir alüminyum pim üzerine monte edin.

Alüminyum pime iletken bir yol oluşturmak için blok kenarlarını kolloidal gümüş macunla kaplayın.

Seri blok yüz taramalı elektron mikroskobu (SBFSEM) kullanarak doku bloğunu inceleyin.

SBFSEM içinde, ultramikrotom bloğu sırayla ultra ince katmanlar halinde dilimlerken, düşük voltajlı bir elektron ışını açıkta kalan yüzeyi tarar.

Geri saçılan bir elektron dedektörü, mitokondriyi ve çevresindeki hücresel yapıları ortaya çıkaran yüksek çözünürlüklü 2D görüntüler yakalar.

Uygun yazılımı kullanarak, görüntü netliğini artırmak için parlaklığı ve kontrastı ayarlayın.

Beyin dokusunun 3B hacmini yeniden oluşturmak için sıralı görüntüleri hizalayın. Bu 3D rekonstrüksiyon, mitokondriyal morfolojinin, uzamsal dağılımın ve bunların nöronal bölmeler içindeki ilişkilerinin hassas bir şekilde haritalanmasına izin verir.

Numuneleri ilgilenilen alana göre kesin ve jelleştirici siyanoakrilat süper yapıştırıcı kullanarak bir alüminyum pim üzerine monte edin. A