Fare Retinal Ganglion Hücre Alt Tiplerinin Floresan İzleme ile Tanımlanması

0 görüntüleme3:20 dk • May 29th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Floresan olarak etiketlenmiş retinal ganglion hücreleri veya RGC'ler içeren transgenik bir fareden izole edilmiş bir retina dokusunu bir kayıt odasına yerleştirin.

Görsel bilgi, aksonları optik sinir yoluyla beyne ileten RGC'lere iletilir.

RGC alt tipleri, iç retina tabakası içinde alt tabakalara ayrılan dendritlerinin dallanma desenleri ile ayırt edilir.

Retina dokusunu düzleştirin ve bir doku ankrajı kullanarak sabitleyin.

Odayı bir mikroskop aşamasına aktarın ve RGC canlılığını korumak için oksijenli bir çözelti perfüze edin.

Kızılötesi aydınlatmayı kullanarak floresan RGC'leri tanımlayın.

Floresan izleyici içeren bir pipeti bir RGC üzerine yerleştirin.

Tıkanmayı önlemek için pozitif basınç uygulayın.

Negatif basınca geçin, bir sızdırmazlık oluşturmak için zarı pipetin içine çekin.

Membranı yırtmak için emme uygulayın ve dendritlere izleyici difüzyonunu kolaylaştıran bir tam hücre konfigürasyonu oluşturun.

RGC alt tiplerini tanımlamak için dendritik morfolojiyi ve tabakalaşmayı gözlemleyin.

Retinayı oksijenli hücre dışı solüsyonda yıkayın ve plastik bir transfer pipeti ile cam tabanlı bir kayıt odasına aktarın. Bundan sonra, fotoreseptör tabakası aşağı bakacak şekilde dokuyu dikkatlice düzleştirmek için forseps kullanın. Bir pipet kullanarak fazla sıvıyı çıkarın. Ve dokuyu naylon ağlı bir platin halka kullanarak sabitleyin. Daha sonra odayı oksijenli hücre dışı çözelti ile doldurun ve bir mikroskop aşamasına monte edin. Dokuyu oksijenli hücre dışı çözelti ile dakikada 2 ila 4 mililitre perfüze edin.

Bu prosedüre hazırlanmak için, bir mikro pipet çektirme kullanarak elektrofizyolojik kayıtlar için bazı cam mikro pipetleri çekin. IR-DIC optiği kullanarak ganglion hücre tabakasını gözlemleyin. Daha sonra yaklaşık 480 nanometrede epifloresan kullanarak GFP artı ganglion hücrelerini tanımlayın. Ardından, DIC'de hücre içi çözelti ile doldurulmuş pipeti bulun. Hafif pozitif basınç uygulayın ve amplifikatör üzerindeki herhangi bir voltaj ofsetini sıfırlayın.

Ardından, cam mikro pipeti GFP pozitif bir hücre üzerine indirin ve sızdırmazlık direncini izlemek için test voltajı komut adımlarını uygulayın. Negatif basınç, pipet ile hücre zarı arasında bir Giga ohm conta oluşturmalıdır. Stabil bir sızdırmazlık oluşturduktan sonra, tüm hücre erişimi elde etmek için kısa negatif basınç darbeleri uygulayarak zarı yırtın. Hücrenin dendritlerinin floresan izleyici ile dolması için bir ila iki dakika bekleyin.

11:01

Akış Sitometresi ile Primer Sıçan Retinalı Ganglion Hücrelerinin (RGC) İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:17

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:53

Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:02

Genetik Etiketli Retina Ganglion Hücreleri Işık Tepkisi Record İzole Retina Hazırlık

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:26

Fare Retina Ganglion Hücreleri Transfeksiyon tarafından In vivo Elektroporasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:30

Bozulmamış Retina Elektrofizyolojik Karakterizasyonu GFP-ifade eden hücre popülasyonlarının

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:10

Floresanla Aktive Edilen Hücre Sıralaması Kullanılarak Murin Retinal Ganglion Hücrelerinin İzole Edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:54

Wholemount Sıçan Retina Immunohistochemical ve Kalsiyum Görüntüleme Yöntemleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:26

Retinal Ganglion Hücrelerinin Tanımlanmış Alt Kümelerinin Tek Hücreli RNA-Seqi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:03

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026