JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:58 dk. • May 29th, 2025
Cerrahi olarak hazırlanmış ince kafatası kortikal penceresinin üzerine sabitlenmiş bir kafa plakası ile anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.
Fareyi sırtüstü yatırın. Femoral veni ortaya çıkarmak için medial uyluk derisini çıkarın.
Kan plazmasını etiketlemek için damar içine bir floresan boya konjugatı enjekte ederek kan damarı görselleştirmesini sağlar.
İnsizyonu dikin.
Fareyi sabitlemek için fareyi çevirin ve kafa plakasını bir emniyet kemerine sabitleyin.
Kurulumu iki fotonlu bir mikroskop aşamasına aktarın.
Kortikal pencerenin üzerine tuzlu su ekleyin. Objektif lensi tuzlu suya temas edene kadar indirin.
Parlak alan aydınlatmasını kullanarak görüntüleme bölgesini bulun.
İki fotonlu görüntülemeye geçin.
Mikroskobun lazeri, düşük enerjili yakın kızılötesi ışığı beyne odaklar.
Lazerin odak noktasında, iki foton boyayı uyarmak için enerjilerini birleştirerek kan damarlarının floresan olmasını sağlar.
Atardamarları damarlara bağlayan küçük kan damarlarından oluşan bir ağ olan bir kılcal yatağı tanımlayın ve büyütün.
Beynin mikro damar sistemini analiz etmek için görüntüler elde edin.
Bu prosedürde, farenin medial sol uyluğundaki cildi çıkarın. Sonra, femoral veni bulun. 1 mililitrelik bir şırınga ve 30 gauge bir iğne kullanarak, 130 mikrolitre floresan boya çözeltisi hazırlayın. 100 mikrolitre boyayı yavaşça femoral ven içine enjekte edin.
İğneyi çıkardıktan sonra, herhangi bir kanamayı durdurmak için enjeksiyon bölgesine sabit, hafif bir baskı uygulayın ve boyanın beş dakika boyunca dolaşmasına izin verin. Daha sonra ameliyat bölgesini dikişlerle kapatın. Fareyi dikkatlice karnına çevirin ve fare kafası plakası kablo demetine yerleştirin. İn vivo iki fotonlu görüntüleme için, cerrahi cihazı iki fotonlu mikroskoba taşıyın ve hayvanın anestezi seviyesini koruduğunuzdan emin olun.
Daha sonra, kafa plakası rezervuarına az miktarda %0,9 salin yerleştirin ve mikroskop objektifini tuzlu su ile temas edecek şekilde indirin. Ardından, parlak alan görüntüleme hedefini kullanarak ilgilendiğiniz alanı bulun. Daha sonra, iki fotonlu görüntülemeye başlayın. Görüntüleme ekranında bir kılcal yatak bulun ve optik yakınlaştırmayı 2 kullanarak bu alanı büyütün. İki fotonlu görüntüleme yazılımını kullanarak kılcal damarların görüntülerini elde edin.