Fare Retina Koni Fotoreseptörlerinde Kalsiyum Dinamiğini İzlemek için İki Foton Mikroskobu

İki fotonlu bir mikroskop altında zara monte fare retina dokusu içeren bir lamel yerleştirin.

Doku, koni fotoreseptörlerinde FRET bazlı bir kalsiyum biyosensörü eksprese eder.

Suya daldırma hedefi kullanarak dokuya odaklanın.

Arka plan aydınlatması altında, koni akson terminalleri depolarize kalır ve kalsiyum akışına izin verir.

Hücre içi kalsiyum bağlanması, biyosensörün konformasyonunu değiştirerek verici ve alıcı floroforları daha yakın hale getirir.

İki fotonlu görüntülemeye başlayın.

Mikroskobun lazeri, düşük enerjili yakın kızılötesi ışığı dokuya odaklar.

Lazerin odak noktasında, iki foton aynı anda biyosensörü uyararak vericiden alıcıya enerji transferini tetikler.

Bu, donör floresansını azaltırken alıcı floresansını arttırır.

Floresan oranını hesaplayın.

Ardından, konileri hiperpolarize etmek ve hücre içi kalsiyum seviyelerini azaltmak için ışık stimülasyonu sağlayın.

Bu, biyosensörün konformasyonunu tersine çevirir, vericiden alıcıya enerji transferini engeller ve floresan oranını düşürür.

Koni akson terminallerinde ışıkla uyarılmış kalsiyum dinamiklerini analiz etmek için yanıtları kaydedin.

Tutma odasından kayıt odasına bir dilim aktarın ve hemen karboksijenli hücre dışı bir çözelti