JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:56 dk. • June 17th, 2025
Progenitör ve nöronal hücreler gibi fare embriyonik primer serebral korteks hücrelerini içeren polimer kaplı çok kuyulu bir plaka alın. Progenitör hücreler, etiketleme ve izleme için floresan proteinleri eksprese etmek üzere transfekte edilir.
Kararlı bir görüntüleme ortamı için plakayı ters çevrilmiş bir floresan mikroskobunun önceden ısıtılmış inkübasyon odasına aktarın.
Tutarlı görüntüleme konumları için plaka üzerindeki referans konumunu bulun.
Transfekte edilmiş hücreleri gözlemleme olasılığını en üst düzeye çıkarmak için daha yüksek büyütmede kuyu başına birden fazla görüntüleme alanı seçin.
Düzenli aralıklarla, hücre morfolojisini ve dinamiklerini ortaya çıkarmak için faz kontrast görüntüleri ve floresan protein ekspresyonunu izlemek için floresan görüntüleri aynı anda yakalayın.
Progenitör hücre bölünmesini ve nöral soylara farklılaşmasını izlemek için hızlandırılmış faz kontrastı ve floresan görüntüleri karşılaştırın.
Retrovirüs ile transdüksiyona uğramış hücreleri görüntülemek için, hücreleri 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit sabit koşullarında tutmak için doku kültürü plakasını sıcaklık ve karbondioksit kontrolörlerine bağlı bir görüntüleme odasına yerleştirin.
XY ekseninde sıfır noktası görevi görecek bir konum seçin ve sıfır noktasını kalibre edin. 10 kat büyütmede görüntülenecek kuyu başına 10 ila 15 konum seçin. Yazılımı, fototoksisiteyi azaltmak için her beş dakikada bir faz kontrast görüntüleri ve her üç saatte bir floresan görüntüleri alacak şekilde ayarlayın. Deneyin ilk üç saatinde odağı kontrol edin ve ayarlayın, çünkü sıcaklık dengelenerken değişebilir.