Postnatal Serebellar Granül Hücre Migrasyonunun Konfokal Makroskopi ile Ex Vivo Görüntülenmesi

0 görüntüleme3:59 dk • June 17th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğum sonrası sıçan yavrusu beyninden elde edilen serebellar bir dilim ile çok kuyulu bir ortam içeren bir plaka ile başlayın.

Ortamı çıkarın ve granül hücrelerini (GC'ler) etiketlemek için dilimi bir sitoplazmik floresan boya çözeltisinde inkübe edin.

Dilimi bir transwell insert membranına aktarın ve fazla boyayı çıkarın.

Ek parçayı çıkarın ve kuyuyu ortamla doldurun. Ardından, eki değiştirin ve dokuyu kaplamak için ortam ekleyin.

Dokunun insert membranına yapışmasına izin vermek için inkübe edin.

Plakayı konfokal bir makroskopa bağlı bir inkübatöre aktarın ve plakanın üzerine bir cam kapak yerleştirin.

Kültür koşullarını ayarlayın, dokuyu daha fazla inkübe edin, ardından görüntülemeye başlayın.

Lazer aydınlatması üzerine, etiketli GC'ler floresan parlar.

GC'lerin serebellumun moleküler tabakası boyunca radyal göçünü görselleştirmek için hızlandırılmış görüntüler yakalayın.

Görüntüleme yazılımını kullanarak, GC'lerin göç mesafesini analiz edin.

Numuneyi dilimledikten sonra, bunları bir miktar HBSS ile altı oyuklu bir plakaya aktarmak için kesik bir beyaz ampul pipeti kullanın. Her kuyucuğa en fazla üç dilim yükleyin. Daha sonra, yüklenen her bir kuyucuktaki ortamı boşalttıktan sonra, 10 mikromolar floresan boya içeren beş mililitre yükleme çözeltisi ekleyin. Numuneleri ışıktan korumak için plakayı folyo ile örtün. Ardından plakayı 35 RPM'ye ayarlanmış bir mutatöre koyun. Boyanın hücreleri etiketlemesine izin vermek için plakayı oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin.

Şimdi, dilimleri daha önce olduğu gibi, üç mikron gözenekli bir transwell ekinin zarına aktarın. Ardından yükleme ortamını aspire edin ve sadece dilimleri bırakın. Şimdi, kuyuyu 1.9 mililitre DMEM ile doldurmak için eki ve dilimleri çıkarın. Ardından eki geri takın ve dokuları kaplamak için 100 mikrolitre daha DMEM ekleyin.

Bu hazırlığı iki saat inkübe edin, daha sonra granül hücreleri görünür olacaktır. Plakayı kapaksız olarak konfokal bir makroskop üzerinde sabit gaz akışı olan bir çevre odasına aktarın. Ardından, konfokal makroskopun plaka ekine bir cam kapak yerleştirin. Hızlandırılmış deneyler için, devam etmeden önce hücrelerin odada iki saat daha kuluçkaya yatmasına izin verin.

Doku dilimlerinde göç eden granül hücrelerini görselleştirmek için preparatı 488 nanometre ışıkla aydınlatın ve 2X kuru objektif kullanın. 500 ila 530 nanometre arasındaki floresan emisyonlarını tespit edin. ImageJ'i kullanarak, zaman atlamalı filmin her görüntüsü için standart sapma modunu kullanarak bir Z yığını projeksiyonu gerçekleştirin.

Her görüntünün kontrastını ve parlaklık düzeylerini, etiketli granül hücrelerinin kolayca görülebilmesi için ayarlayın. Şimdi, partikül analizi menüsünden Manuel İzleme eklentisini seçin. Hızlandırılmış görüntü dizisi boyunca etiketlenmiş her hücre gövdesinin merkezi noktasına tıklamak için eklentiyi kullanın. Ardından, daha fazla analiz için ham izleme verilerini bir elektronik tabloya aktarın.

ImageJ'den dışa aktarılan ham izleme verilerini, her hücreyi ve ilişkili konumları tanımlayan akıllı ev yapımı bir araçla yeniden düzenleyin. Programı kullanarak, her hücre için toplam kat edilen mesafeyi ve ortalama göç hızını hesaplayın.

13:33

Embriyonik Fare Beyni Organotipik Dilim Kültüründe Nöronların Geçiş Sürekli Konfokal Görüntüleme Kullanımı Utero'da Elektroporasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:09

Embriyonik Fare Beyincisinden İzole Edilen Nöronların Birincil Kültürü

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:20

Serebellar Granül Nöron Morfolojisi ve Sinaps Gelişimini Incelemek için In Vivo Postnatal Elektroporasyonun Kullanılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:25

Yetişkin Fare önbeyin akut dilimleri içinde Neuroblast Göç Time-lapse Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:04

Farklı Gelişim Aşamalarında Serebellar Granül Nöronlarının Sinaptogenezinin Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:51

Fare Akut Beyin Dilimleri Neuroblast Göç vivo Doğum Sonrası Elektroporasyonla ve Time-lapse Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:07

Serebellar Granül Nöronlar Genetik Manipülasyon In Vitro Ve In Vivo Nöronal morfoloji ve Göç Eğitim için

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:48

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:10

Konfokal Makroskopi kullanarak Postnatal Serebellar Granül Hücre Göç Ex Vivo Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:02

Ex Vivo Chick Serebellar Dilimleri Kültür ve Mekansal Elektroporasyon granül hücre öncülerinin Hedefli

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026