JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:24 dk • June 17th, 2025
Mobil bir kafes sistemine sabitlenmiş anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.
Fare, nöronların kalsiyuma duyarlı bir floresan proteini eksprese ettiği beynin amigdalasını hedefleyen önceden implante edilmiş bir gradyan kırılma indisi merceğine sahiptir.
Lens yüzeyi koruma amacıyla kaplanmıştır.
Farenin uyanmasına izin verin, ardından sürtünmesiz kafes dönüşü için hava akışı uygulayın.
Lens kapağını çıkarın ve beynin üzerine minyatür bir mikroskop yerleştirin.
Mikroskobun LED'ini açın. Ardından, mercek görüş alanında ortalanacak şekilde mikroskobu hizalayın.
Lens görüntüsünü yakalayın ve mikroskop konumunu ayarlayın.
Kafes döndükçe, farenin bacak hareketleri korku yaratır ve amigdala nöronlarını uyarır.
Bu, floresan göstergelere bağlanan bir kalsiyum iyonu akışını tetikler.
LED ışık, kalsiyuma bağlı bu göstergeleri uyararak floresan yapmalarına neden olur.
Gradyan kırılma indisi merceği, bu floresansı verimli bir şekilde yakalar ve mikroskoba iletir.
Bu, amigdala nöronal aktivitesinin gerçek zamanlı kalsiyum görüntülemesini sağlar.
GRIN lens implantasyonunun kalitesini değerlendirmek için, anestezi uygulanmış farenin altına, bir mobil ev kafes sisteminin baş çubuğuna bir karbon kafes yerleştirin ve kafesin sürtünme olmadan serbestçe hareket etmesi için hava akışını açın. İmplante edilmiş GRIN merceğinin yüzeyi yazılım içindeki görüntü alanında görünene kadar mikroskobu indirmeden önce, minyatür bir mikroskobu çerçeveye dikey olarak hizalamak için bir mikroskop tutucu ve bir stereotaksik manipülatör kullanın. İmplante edilmiş GRIN lensin merkezini görüş alanının merkeziyle hizalayın ve implante edilmiş GRIN lens yüzeyinin görüntüsünü yakalayın. Ardından, GCaMP eksprese eden hücrelerin görünümü için görüntüyü gözlemlerken mikroskobun objektif merceğini yavaşça kaldırın.