Koroidea pleksus nedir?

Koroidea pleksus, beyin ventriküllerinde serebrospinal sıvı üretiminden sorumlu bir hücre ağıdır.

Numune hazırlamada fiksasyon neden önemlidir?

Fiksasyon, hücresel yapıyı korur ve sonraki işleme adımlarında bozulmayı önler.

Protokolde osmiyum tetroksitinin rolü nedir?

Osmiyum tetroksit, hücre zar lipidlerine bağlanarak zarları daha iyi görüntüleme için stabilize eder.

Dehidrasyon doku örneklerini nasıl etkiler?

Dehidrasyon, su içeriğini çıkararak görüntüleme sırasında doku yapısının bozulmasını önler.

Taramalı Elektron Mikroskobu Kullanılarak Bir Fare Beyin Koroid Pleksusunun Görselleştirilmesi

Q: Numuneyi platinle kaplamanın amacı nedir?

Platin tabakası, SEM sırasında elektronları dağıtarak yük birikmesini önler ve görüntüleme artefaktlarını minimize eder.

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Koroid pleksusu bir fare beyninden bir örnek sepetinde alın.

Beyin ventrikülleri içinde yer alan doku, apikal yüzeylerinde mikrovillus içeren bir epitel hücresi tabakası içerir.

Hücresel mimarisini korumak için dokuyu fiksatif bir çözelti içinde inkübe edin.

Fazla fiksatifi çıkarmak ve pH'ı stabilize etmek için bir tamponla yıkayın.

Dokuyu, hücre zarı lipidlerine bağlanan, zar stabilitesini koruyan osmiyum tetroksit ile inkübe edin, ardından fazla reaktifi durulayın.

Görüntüleme sırasında doku bozulmasını önlemek için artan alkol konsantrasyonları kullanarak dokuyu kurutun.

Dokuyu kurutun, karbon kaplı bir numune yuvasına sabitleyin, ardından iletken bir platin tabaka ile kaplayın.

Taramalı elektron mikroskobu kullanarak, bir elektron demetini yüzeye odaklayın. Platin tabakası elektronları dağıtarak yük birikmesini önler ve görüntüleme artefaktlarını en aza indirir.

Bir dedektör, yüzeyden geri saçılan elektronları yakalar ve mikrovilluslu epitel hücreleri sergileyen dokunun bir görüntüsünü üretir.

SEM için numune hazırlamayı gerçekleştirmek için, yeni izole edilmiş koroid pleksus'u yeni yapılmış fiksasyon solüsyonuna aktarın ve gece boyunca 4 santigrat derecede inkübe edin. Bittiğinde, numuneyi her biri beş dakika boyunca 3 ila 5 mililitre 0.1 molar sodyum kakodilat tamponu kullanarak üç kez yıkayın.

Numuneleri 3 ila 5 mililitre% 2 osmiyum tetroksit içinde 0.1 molar sodyum kakodilat tamponunda 30 dakika boyunca sabitleyin. Daha sonra numuneleri her biri 3 ila 5 mililitre ultra saf su kullanarak beş dakika boyunca üç kez yıkayın. Daha sonra, numuneleri, etil alkol çözeltisi başına 15 dakika ile artan bir dizi buz gibi soğuk etil alkol konsantrasyonunda kurutun. Numuneyi düzgün bir şekilde kurutmak için kritik nokta kurutucu kullanın. Numuneyi bir karbon çıkartma ile bir numune yuvasına dikkatlice yerleştirin ve SEM kullanarak koroid pleksus numunelerini görselleştirin.