JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:18 dk. • June 17th, 2025
Ortam içeren kaplanmış cam tabanlı bir tabak üzerinde kültürlenmiş birincil kemirgen kortikal nöronları alın.
Bu hücreler, genetik olarak kodlanmış ALS ile ilişkili bir proteini ve bir kalsiyum biyosensörünü eksprese eder.
Ortamı düşük potasyumlu klorür tamponu ile değiştirin.
Dinlenme nöronal aktivitesini ve temel kalsiyum seviyelerini korumak için kuluçkaya yatırın.
Çanağı konfokal bir mikroskop tablasına monte edin ve perfüzyon tüpünü yerleştirin.
Parlak alan aydınlatmasını kullanarak nöronlara odaklanın, ardından floresan görüntülemeye geçin.
Mikroskobun lazerini kullanarak, biyosensörü uyarın ve temel hücre içi kalsiyum seviyelerini belirlemek için floresan emisyonunu kaydedin.
Ardından, tabağı yüksek potasyum klorür tamponu ile perfüze edin.
Yüksek potasyum konsantrasyonu nöronları depolarize eder ve presinaptik terminallerde voltaj kapılı kalsiyum kanallarını açar. Bu, nöronal sinaptik aktiviteyi başlatan kalsiyum akışına izin verir.
Artan hücre içi kalsiyum, biyosensöre bağlanarak floresansı artıran konformasyonel bir değişikliğe neden olur.
Hücre içi kalsiyum seviyelerindeki gerçek zamanlı değişiklikleri ölçmek için floresan kaydetmeye devam edin ve nöronal sinaptik aktiviteyi ortay
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin