Bir farenin gerçek zamanlı kalsiyum görüntülemesi Bir miniskop kullanarak medial prefrontal korteks

Nöronların genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerini ifade ettiği medial prefrontal korteksi hedefleyen bir gradyan indeksli lens ile implante edilmiş anestezi uygulanmış bir fareyi ele alalım.

Lens kapağını çıkarın ve net ışık iletimi için yüzeyini temizleyin.

Minoskopu lens tutucusuna sabitleyin.

En uygun odak düzlemini belirlemek için miniskop konumunu ayarlayın. Bu ayarlama, nöronal hücre gövdelerinin net bir şekilde görüntülenmesini sağlar.

Kabloyu çıkarın ve farenin iyileşmesine izin verin.

Kabloyu miniskopa bağlayın ve fareyi davranışsal kayıt kurulumuna sahip bir odaya aktarın.

Görüntüleme sırasında miniskop, hücre içi kalsiyum akışı üzerine floresan yayan kalsiyum göstergelerini uyarmak için ışık yayar.

Gradyan indeksli lens, bu optik sinyalleri derin beyin dokularından miniskopa ileterek ışık saçılımını azaltır ve nöronal aktivitenin gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesini sağlar.

Nöronal aktiviteyi belirli davranışlarla ilişkilendirmek için kaydedilen kalsiyum geçici aktivitesini davranışsal gözlemlerle işleyin.

Fareyi izofluran ile kısa bir süre uyuşturduktan sonra, koruyucu kapağı çıkarmadan önce tabandaki kilitleme vidasını küçük bir tornavidayla gevşetin ve GRIN lensin yüzeyini asetonla ıslatılmış bir pamuklu çubukla temizleyin. Minoskopu kabloya bağlayın ve NewView künt forseps yardımıyla hafifçe sıkarak veya gevşeterek minoskopun tabana göre konumunu ayarlayarak en iyi odak düzlemini belirlemeye başlamak için yazılım. En iyi odak düzlemi belirlendikten sonra, kabloyu çıkarmadan ve fareyi ev kafesine geri yerleştirmeden önce kilitleme vidasını sıkın.

Canlı akış işlevi aracılığıyla fare davranışı arenasını görüntülemek için davranış kamerası yazılımını açın. Üst kameranın odağını manuel olarak ayarlayın. Trigger Strobe'u seçin ve Tetikleyiciyi Etkinleştir/devre dışı bırak'ı işaretleyin ve ardından Kayıt düğmesine tıklayın. Ardından, davranış kayıtlarının kaydedileceği konumu seçmek için gözat'ı kullanın. İstediğiniz görüntü formatını seçin.

Fareyi arenaya yaklaştırın ve miniskopu veri toplama sistemine bağlı kabloya bağlayın. Ardından, fareyi arenanın ortasına yerleştirin. Davranış kamerası yazılımında, Kaydı Başlat'ı tıklayın.

NewView'da LED1'i kontrol edin, Yakala'ya tıklayın ve ardından kayda başlamak için düğmeleri tetikleyin. Bu, kalsiyum görüntüleme ve fare davranışının aynı anda kaydedilmesine izin verir. 3.000 kare sonra Durdur'a basın ve dosyaları kaydedin.