JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:06 dk. • June 17th, 2025
Stereomikroskop altında oksijenli fizyolojik bir tampon içeren bir montaj odasında anestezi uygulanmış transgenik zebra balığı larvaları ile başlayın.
Beyindeki beyincik, floresan sitoplazmik proteinleri eksprese eden genetik olarak değiştirilmiş Purkinje nöronları içerir.
Fazla ortamı çıkarın, ardından stabil görüntüleme için larvaları hareketsiz hale getirmek için erimiş agaroz ekleyin.
Beyincik'i görselleştirmek için larvaların sırt tarafını yukarı doğru yönlendirin.
Katılaştıktan sonra fazla agarozu kesin. Bir cam iğne kullanarak, beynin üzerindeki pigmentli cildi açığa çıkarmak için eksize edin.
Ters mikroskop altında görüntülemek için agaroz bloğunu erimiş agaroz içeren bir görüntüleme odasına çevirin.
Nöronal fonksiyonu korumak için fizyolojik tamponu ekleyin.
Odayı ters çevrilmiş konfokal bir mikroskop altına yerleştirin. Floresan proteinleri uyarmak için uyarma ışığı uygulayın ve etiketli nöronların görselleştirilmesini sağlayın.
Pigmentli cilt hücreleri, çıkarılmazsa, uyarma ışığını dağıtır ve emer, bu da floresan yoğunluğunu azaltır.
Derinin çıkarılması, floresan yoğunluğunu artırmak için ışık penetrasyonunu iyileştirir ve nöron görselleştirmesini kolaylaştırır.
Larvaları gömmek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin