Fare Beyin Dokusundaki Metalleri Görselleştirmek için Lazer Ablasyon-Endüktif Eşleştirilmiş Plazma-Kütle Spektrometresi

Bir fare beyin dokusu örneğini ve standartlarını bir lazer ablasyon odasına yerleştirin.

Standartlar, kuzu beyin dokusu homojenatlarına çivilenmiş bilinen metal konsantrasyonlarını içerir.

Odayı argon gazı ile doldurun ve dokuya ultraviyole lazer ışını odaklayın.

Lazer, numuneyi ve standartları doğrusal bir modelde buharlaştırarak ince parçacıklardan oluşan bir aerosol oluşturur.

Argon gazı, parçacıkları yüksek sıcaklıkta bir iyonizasyon kaynağı olan endüktif olarak eşleşmiş plazmaya taşır.

Plazma, parçacıkları pozitif yüklü iyonlara atomize eder ve iyonize eder.

İyonlar kütle spektrometresine girer ve kütle-yük oranlarına göre ayrılır.

Elde edilen veriler, numunede bulunan metalleri tanımlamak için bir referans veri tabanı ile karşılaştırılır. Standartlardan bir kalibrasyon eğrisi oluşturulur.

Numunedeki metal konsantrasyonlarını, sinyal yoğunluklarını standartlarınkilere göre kalibre ederek hesaplayın ve metallerin beyin dilimi içindeki uzamsal dağılımını ortaya çıkarın.

İlk olarak, bir beyin dokusu örneği yerleştirin ve tüm matris uyumlu doku standartlarına lazer ablasyon odasına yerleştirin. Örneklerin LACCD kamera alan derinliği içinde olduğundan emin olun. Hazne kapağını kapatın ve vidaları parmakla sıkın.

Ardından ICP-MS yazılımında taşıyıcı gaz vanasını açın ve akış hızını dakikada 1,2 litre olarak ayarlayın. LA yazılımında, 2 hacimli bir ablasyon hücresi için taşıyıcı gazla ablasyon hücresinin 30 dakikalık bir temizliğini çalıştırın. Her 10 dakikada bir, hücrede kalan hava miktarını azaltmak için numune aşamasını odanın her bir köşesine taşıyın.

ICP-MS'yi açın ve cihazın iki saat ısınmasına izin verin. Cihaz ısınırken, lazer ablasyon yazılımında, ilk doku standardının yüzeyi boyunca yaklaşık 3 milimetre uzunluğunda bir ablasyon çizgisi çizin. Ablasyon çizgisine tıklayın ve varsayılan ışın çapını, tarama hızını ve radyant akıcılığı ayarlayın. Çizgileri kiriş çapına göre ayırarak çizgiyi altı kez çoğaltın. Her standart için bu işlemi tekrarlayın.

Ardından, standartlarla aynı parametreleri kullanarak, numunenin sol üst köşesinden numunenin en geniş noktası boyunca ablasyon alanını numunenin üzerine çizmek için Çizgi aracını kullanın.

Numunenin standartlarda kullanılanla aynı aralıkla tam olarak kaplanması için çizgiyi gerektiği gibi çoğaltın. Ardından, numuneyi taradıktan sonra veya her numune arasında en geç 20 saat içinde standartların aralıklı taraması için bir dizi çizgi çizin. Deneyin sonuna standartların bir taramasını ekleyin.

Hat uzunluğuna ve tarama hızına bağlı olarak, numune ve standart hatlar için analiz süresini belirleyin. Ardından ICP-MS yazılımında yeni bir parti oluşturun ve Zaman Çözümlü Analiz'i seçin. İlgilenilen kütle / yük oranı değerlerini seçin ve her oran için entegrasyon sürelerini ayarlayın, böylece bir döngü için toplam entegrasyon süresi 0,25 saniye olur. Toplu işlemi kaydedin.

Standart bir parti için, lazer ısınma ve yıkama sürelerini hesaba katmak için her satırın analiz süresini 15 saniyelik ek bir tamponla doldurun. Her standart satır için bir alım içeren bir örnek çalıştırma listesi ayarlayın. Numune partisi için, standart partiyi çoğaltın ve numune ablasyon modeline göre alım sürelerini ve sayısını ayarlayın.

ICP-MS ısındıktan sonra, ilk partiyi kuyruğa ekleyin ve yazılımın LA cihazından bir tetikleyici beklediğinden emin olun. Ardından, LA yazılımında lazer güç kaynağını açın ve lazer ısınma ve yıkama sürelerini ayarlayın. Lazer dizisini başlatın ve ICP-MS'nin ablasyondan sonra veri toplamaya doğru şekilde başladığını kontrol edin.

Veriler toplandıktan sonra, standartlar için verileri CSV dosyalarından çıkarın. Taban çizgisi çıkarma işlemini gerçekleştirin ve arka plan sinyalini hariç tutun. Doku standartlarındaki deliklerin neden olduğu sinyal düşüşlerini belirleyin.

Bu düşük sinyal alanlarını maskeleyin ve ardından verileri bir elektronik tablo olarak dışa aktarın. Tanımlanan her öğe için CPS'den PPM'ye bir dönüşüm faktörü hesaplayın. Her standart için bu işlemi tekrarlayın.

Ardından, nicel görüntü oluşturma yazılımını açın ve örnek verileri CSV dosyalarından içe aktarın. Arka plan düzeltmesi uygulamak için arka planın birkaç alanını seçin. Grafik düzenleme aracını seçin, görüntüye sağ tıklayın ve Görüntü Görünümünü Değiştir'i seçin. Z'deki ilk rengi büyük bir negatif değere değiştirin.

Ve tıklayın tamam arka plan sinyalini geliştirmek için. Ardından Standartlar sekmesinde, her standart için CPS PPM düzeltme faktörlerini girin ve Git'e tıklayın. Veri sekmesinde Veri Tarayıcı'yı açın, düzeltilmiş bir görüntü dosyasına sağ tıklayın ve Yeni Görüntü'ye tıklayın.

Görüntü Görünümünü Değiştir penceresini açın ve renk tablosunu ve ölçeği ayarlayın. Görüntüye bir renk ölçeği yerleştirmek için Ek Açıklama Ekle yardımcı programını kullanın. Renk ölçeği penceresinde renk ölçeğini ayarlayın. Görüntü renklendirildikten ve açıklama eklendikten sonra, görüntüyü kopyalayıp başka bir programa yapıştırın veya görüntüyü görüntü oluşturma yazılımından dışa aktarın.

ROI araçlarını etkinleştirmek için Analiz paketlerinden Görüntü İşleme'yi seçin ve bir görüntü seçin. Görüntü sekmesinde ROI'ye tıklayın ve ROI Draw'ı başlatın. İlgilendiğiniz bölgeyi seçin ve ardından ROI'yi Bitir'e tıklayın.

Görüntü sekmesinde, ROI verilerini almak için İstatistikler'e tıklayın. Verileri kopyalayıp bir elektronik tabloya yapıştırın ve her bir yatırım getirisi eklendiğinde tasarruf ettiğinizden emin olun. İşlemi gerektiği kadar tekrarlayın.