Organotipik Bir Fare Beyin Diliminde Tümör Büyümesini Değerlendirmek için Biyolüminesans Görüntüleme

Tümör hücreleri ile organotipik bir fare beyin dilimi içeren çok kuyulu bir plaka alın. Bu hücreler lusiferaz enzimini eksprese eder.

Ortama lusiferin çözeltisi eklemek için eki kaldırın ve iyice karıştırın. Ek parçayı tekrar kuyuya yerleştirin.

Luciferin, tümör hücresine girer ve lusiferaz tarafından oksitlenerek biyolüminesans yayar.

Plakayı, numuneden yayılan biyolüminesansı yakalayabilen in vivo görüntüleme sisteminin görüntüleme odasının içine yerleştirin.

Harici ışık girişimini önlemek için hazneyi kilitleyin.

Görüntü başına tek bir kuyu yakalamak için kamera ayarlarını yapın.

Kuyuyu doğrudan kameranın altına yerleştirmek için sahneyi hareket ettirin.

Yayılan biyolüminesansın yoğunluğuna bağlı olarak alım süresini optimize edin.

Tümörün şeklini tanımlayın, ardından biyolüminesans görüntülemeye başlayın.

Beyin dilimindeki tümör büyümesini değerlendirmek için biyolüminesan sinyalini ölçün.

Steril bir başlık içindeki eklerin altındaki ortama mililitre lusiferin çözeltisi başına 5 mikrolitre 30 miligram pipetleyin. Altı oyuklu plakayı, kapaklı olarak cihazın görüntüleme odasının içine, sabit kameranın altına yerleştirin ve oda kapısını kilitleyin.

Yazılımı açın ve cihazı başlatın. Kamera ayarlarını seçtikten sonra, görüntü başına yalnızca bir kuyunun görselleştirilmesine ve yakalanmasına izin verdikten sonra, görüntülenecek kuyuyu doğrudan kameranın altına yerleştirin. ROI aracını kullanın, tümör şekline ve boyutuna sığdırın. ROI'yi ölçün ve dilimdeki her bir tümörün biyolüminesan sinyalini ölçmek için toplam okumaları raporlayın.