JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:15 dk. • August 7th, 2025
Kırmızı floresan proteini veya RFP ekspresyonunu bloke eden loxP ile çevrili bir STOP kaseti taşıyan genetiği değiştirilmiş bir fare yavrusunu ele alalım.
Yavruyu özel yapım bir stereotaksik çerçeveye sabitleyin ve anesteziyi sürdürmek için buzla örtün.
Saç derisini dezenfekte edin ve lambdayı referans noktası olarak işaretleyin.
Enjeksiyon iğnesini lambdaya göre striatal koordinatlara hizalayın ve kafatasını delin.
İğneyi kafatası yüzeyine geri çekin, ardından hedef derinliğe yerleştirin.
Boya karışımlı viral vektörü kontrollü bir oranda striatuma enjekte edin. Vektör, yeşil floresan proteinleri veya GFP'leri ve Cre rekombinazı kodlar.
Çözeltinin geri akışını önlemek için iğneyi yavaşça geri çekin.
Yavruyu çıkarın ve iyileşmeye izin verin.
Striatal hücrelerde, virüs genomunu serbest bırakarak Cre rekombinaz ve GFP'nin ekspresyonunu sağlar. Cre, loxP ile çevrili STOP kasetini eksize ederek RFP ifadesini etkinleştirir.
Eşzamanlı GFP ve RFP ekspresyonu, başarılı gen manipülasyonunu doğrular.
Yavruyu eldivenle birlikte baş tepsisine yerleştirin ve hipotermi anestezisini sürdürmek için lateks manşonun etrafına biraz kırılmış buz koyun. Ardından yavrunun kafasını %70 etanol ile ovalayın ve lambd
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin