Bir Sıçanda Nöronal Aktivitenin İnhibisyonu ve Elektrofizyoloji Kullanılarak Tespiti

Kafatası açıkta kalacak şekilde stereotaksik bir çerçeveye sabitlenmiş anestezi uygulanmış bir sıçan ile başlayın.

Anatomik yer işaretleri olan bregma ve lambda'yı kullanarak, görsel bilgiyi işlemekten sorumlu derin bir beyin yapısı olan superior colliculus'u bulun.

Bir kemik flebi oluşturmak için delin, çıkarın ve açıkta kalan beyni nemli tutmak için bir tampon uygulayın.

Bir mikroşırıngaya bağlı bir elektrot ile bir mikropipetten oluşan bir enjeksiyon tertibatı yerleştirin.

Mikropipet, nöronal uyarılabilirliği baskılamak için inhibe edici bir nörotransmitter çözeltisi içerirken, elektrot aynı anda nöronal aktiviteyi kaydeder.

Enjeksiyonu superior colliculus'a indirin ve dehidrasyonu önlemek için açıkta kalan yüzeyi erimiş agar ile kaplayın.

Mevcut ışık, nöronları uyarmak ve senkronize aksiyon potansiyellerini uyandırmak için göze yanıp söner.

Reseptörlerine bağlanan ve klorür iyonu akışını tetikleyen nörotransmiteri enjekte edin.

Bu akış, membran potansiyelini hiperpolarize eder, böylece aksiyon potansiyellerini bastırır.

Nörotransmitter konsantrasyonu zamanla azaldıkça, nöronal aktivite düzelir.

Kayıt enjeksiyon pipetlerini hazırlamak için önce dış çapı 1 milimetre olan 7 santimetrelik bir kılcal damarı çekin. Cop dikey model 720 veya benzeri bir ünite için ısıtıcıyı 18'e ve solenoidi bire ayarlayın. Daha sonra, eldiven giyerek, bir açıklık yapmak için ucu manuel olarak kırın ve mikroskop altında iç çapın 30 ila 40 mikrometre arasında olduğunu doğrulayın. Bunu vizörün cetveli ile ölçün. 0,3 ila 0,6 megaohm arasında nispeten düşük bir empedans üretecektir.

Daha sonra konik olmayan uçtan pipete yaklaşık 7 santimetre uzunluğunda gümüş bir tel yerleştirin ve pipetten 1 ila 2 santimetre sarkmasını bırakın. Bu fazla teli kılcal damara dik olarak bükün. Ardından, 30 gauge hipodermik bir iğne alın ve şafta esnek plastik yapıştırıcı uygulayın. Ardından iğneyi mümkün olduğunca yavaş bir şekilde pipete sokun.

Pipet ve iğne arasındaki bağlantı noktasında bir sızdırmazlık oluşturmak için daha fazla yapıştırıcı ekleyin. Pipet ucu yukarı bakacak şekilde düzeneğin yaklaşık 12 saat kurumasını bekleyin. Anestezi uyguladıktan ve fareyi stereotaksik bir çerçeveye koyduktan sonra, oftalmik merhem sürün, başını temizleyin.

Lokal anestezi uyguladıktan ve cerrahi anestezi planını onayladıktan sonra, 10 numara neşter bıçağı kullanarak kafa derisini medyan boyunca kesmeye devam edin. Bu, koronal ve sagital sütürleri ortaya çıkaracaktır. Ardından, cerrahi bir spatula kullanarak lambda ve bregma anatomik referanslarını tanımlayın.

Kafanın konumunu, bu yer işaretleri aynı yatay düzlemde aynı hizada olacak şekilde ayarlayın. Ardından, bregma üzerinde cam tüp gibi ince ve sert bir işaretçiyi sıfırlayın. Ardından, bregma'dan gelen koordinatları kullanarak tüpün konumunu ilgilenilen bir konuma ayarlayın.

Kraniotomi için hedef alanın etrafına bir kare çizmek için bir Sharpie kullanın. Şimdi, cerrahi sterilize matkapla, işaretler boyunca kemiği yavaşça çıkarın. Mümkün olduğunca az basınç kullanarak başlayın ve sürtünme nedeniyle kafa kaynaklı doku hasarını önlemek için matkabı hareket ettirin.

Kemik inceldiğinde, kare bölümü cımbızla dikkatlice çıkarın. Enjeksiyon çubuğu ona nüfuz edeceği için dura materin çıkarılmasına gerek yoktur. İleriye dönük olarak, açıkta kalan korteksi beyin omurilik sıvısı ile sulayın. Önce 5 ila 10 mikrolitrelik bir şırıngayı mineral yağ ile doldurarak enjeksiyonu hazırlayın. Daha sonra, ilgilenilen ilacı fizyolojik tuzlu su içinde bir boya ile hazırlayın. Burada, %0.5 Chicago Sky Blue, 300 mikromolar GABA ile karıştırılır.

Şimdi, önce hazırlanan çözelti ile 1 mililitrelik bir şırınga yükleyerek ve ardından pipeti yüklemek için şırıngayı kullanarak enjeksiyon pipetini doldurun. Şırıngayı çıkarırken, piston üzerinde hafif bir basınç uygulayın, böylece bir vakum enjeksiyondan çözeltiyi çıkarmaz. Olası sızıntı noktalarında sızan sıvıyı kontrol edin. Fazla sıvıyı temizleyin ve sızıntı olup olmadığını tekrar kontrol edin.

Şimdi mikro şırıngayı mineral yağ ile enjeksiyona takın. Ardından fazla çözeltiyi gazlı bezle silin. Enjeksiyon ucunu kontrol edin. İçinden küçük damla çözelti akıtmak mümkün olmalıdır. Aksi takdirde tıkanır veya sızar. Şimdi, enjeksiyonu bir mikro pompa sistemine güvenli bir şekilde monte edin. Daha sonra enjektrobun konumunu hedef koordinatlara getirin ve elektrodu, görsel uyarılmış potansiyellerin kaydedilmesiyle tanımlanabilen üst kollikulusa indirin.

Elektrot indirilirken, tıkanmayı önlemek için düşük bir enjeksiyon hızı uygulayarak küçük bir pozitif basınç uygulayın. Yapıya ulaşıldığında enjeksiyonu durdurun. Enjeksiyonu yerleştirdikten sonra, kurumasını önlemek için açıkta kalan korteksi ılık agar ile örtün.

Elektrotun son yerleştirilmesinden sonra, elektrodu çevreleyen dokunun stabilizasyonuna izin vermek için 30 dakika bekleyin. Daha sonra, superior colliculus'taki nöronal aktivitenin inaktivasyonuna kadar dakikada 40 nanolitre oranında 400 ila 800 nanolitre çözelti enjekte edin. Elektrot, inhibitör çözeltinin enjeksiyonu sırasında sivri uçlarda bir azalma göstermelidir.