Bir fare modelinde glial hücre yeniden programlaması için viral vektörlerin stereotaksik enjeksiyonu

Anestezi uygulanmış bir transgenik fareyi, kafatası açıkta kalacak şekilde stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin.

Bu fare, glial hücrelerde Cre rekombinaz eksprese eder.

Kılcal boruyu tutan stereotaksik kolu kafatasının üzerine yerleştirin ve bregmanın üzerine hizalayın.

Hassas hedefleme için stereotaktik eksenleri ayarlayın.

Dura mater'in sağlam kaldığından emin olarak hedef bölgede bir delik açın. Kemik parçalarını çıkarın.

Kılcal boruyu tamponla yıkayın. Bir hava kabarcığı çizin, ardından aktif olmayan nöronal yeniden programlama ve floresan protein genlerini taşıyan adeno ilişkili virüsü yükleyin.

Kılcal boruyu hedef derinliğe indirin ve viral çözeltiyi glial hücre açısından zengin bölgeye enjekte edin.

Geri akışı önlemek için tüpü dikkatlice geri çekin.

Kesiği kapatın ve iyileşmeye izin verin.

İçselleştirilmiş virüsler, glial çekirdeğe loxP ile çevrili inaktive edilmiş genler iletir. Cre rekombinaz onları çevirir, nöronal yeniden programlama genlerini aktive eder ve nöronal dönüşümü yönlendirir. Yeniden programlanmış internöronlar, nörona özgü promotör altında floresan proteini eksprese eder.

Yeniden programlama faktörlerini enjekte etmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi stereotaks