Bir Test Bileşiğinin Sıçan Merkezi Sinir Sistemine İntratekal Verilmesi

Lomber omurilik kanalına implante edilmiş bir kılavuz kanül ile anestezi uygulanmış bir sıçan ile başlayın.

Beyin omurilik sıvısının veya BOS'un dolaştığı intratekal boşluğa bir açıyla kılavuz kanülden bir kateter teli tertibatı yerleştirin.

Kılavuz kanülü çıkarın ve kateteri yavaşça daha derine ilerletin.

Ardından, teli tamamen çıkarın ve kateteri bir dağıtım sistemine bağlayın.

Omurilik kanalına steril salin enjekte edin ve net bir geçiş sağlayın.

BOS'a yavaşça bir test bileşiği çözeltisi uygulayın, ardından steril tuzlu su ile yıkayın.

Dağıtım sistemini ayırın, kateteri kesin ve ucunu ısıyla kapatın.

Isı yalıtımlı kateteri bağ dokusuna dikin ve ardından cildi kateterin üzerinden kapatın. Bölgeyi temizleyin ve farenin iyileşmesine izin verin.

Test bileşiği, BOS yoluyla merkezi sinir sistemini veya CNS'yi içeren omurilik ve beyne yayılır.

CNS içinde nöronlara girer ve terapötik potansiyel sunar.

Kateterin yerleştirilmesi ve bileşiğin enjeksiyonu için, traş edilmiş pelvisin üzerindeki kaslar arasındaki iki doğal çukuru tanımlayın. Ve bir elinizle çukurları tutarken, omurlar arasındaki ilk büyük girintiyi bulmak için omurgayı kaudalden rostral yöne hafifçe bastırmak ve hissetmek için diğer elinizi kullanın. S1 ve L6 omurları arasındaki intervertebral boşluğu belirledikten sonra, L5 ve L6 omurları arasındaki intervertebral boşluğu belirlemek için hafifçe rostral olarak hareket edin.

Bu bölgedeki deri ve kas kapsülünde 2 santimetreden daha uzun olmayan bir kesi yapmak için bir neşter kullanın, böylece orta hat boyunca rostraldan kaudal yöne kadar, böylece enjeksiyon bölgesi insizyonun merkezinde olacaktır. Kas tabakası görüntülenene kadar bağ dokusunu incelemek için diseksiyon makası kullanın. Kas kapsülünde, L6 bel omurunun dorsal omurga sürecinin hemen yanında 1 santimetrelik bir kesi yapın.

Kılavuz kanül iğnesi tertibatını altıncı bel omurun ön yüzüne yakın bir yere yerleştirin ve düzeneği, iğnenin ucu omurilik kanalına nüfuz edecek şekilde altıncı omurun ön yüzü boyunca intervertebral boşluğa itin.

L6 bel omurun dorsal omurga süreçlerini bulmak için künt forseps kullanın. Daha sonra iğneyi altıncı omurun ön yüzü boyunca intervertebral boşluğa itin.

Kılavuz kanülü iğne boyunca yerine itin. İğneyi çıkarın ve kateter tel tertibatını kılavuz kanüle yerleştirin. Kateteri omurilik kanalına yaklaşık 45 derecelik bir açıyla açıyla açarak, kateterin ucunu kanala yaklaşık 0,3 santimetre zorlayın.

Stile telini kateterin intratekal ucundan yaklaşık 2,5 santimetre çıkarın ve kateter üzerindeki 2 santimetrelik işaret kasın hemen altında görünene kadar kateteri omurilik kanalına ilerletin. Kateter yerindeyken, kateteri ve stile telini yerinde bırakmak için kılavuz kanülü çıkarın.

Kanalın girişinde 2 santimetrelik işaret olana kadar kateteri omurilik kanalına ilerletin ve stile telini tamamen geri çekin. Beyin omurilik sıvısının implante edilmiş katetere girdiği görülebilir. Ardından, doğum kateteri tertibatını 30 gauge iğne ucu aracılığıyla implante edilen kateterin distal ucuna bağlayın.

Daha sonra, 100 mikrolitrelik bir şırıngaya 60 mikrolitre steril salin yükleyin ve ikinci bir şırıngaya 30 mikrolitre test bileşiğinin bir bolusunu yükleyin. Salin şırıngasını doğum kateteri tertibatının boru adaptör ucuna bağlayın ve 20 mikrolitre steril salini intratekal boşluğa yıkayın.

Salinin tamamı yıkandığında, salin şırıngasını bolus yüklü şırınga ile değiştirin ve 30 saniyelik bir süre boyunca intratekal boşluğa 30 mikrolitre test bileşiğini enjekte edin. Bolusun tamamı verildiğinde, bolus yüklü şırıngayı başka bir salin yüklü şırınga ile değiştirin ve kateteri ek 40 mikrolitre salin ile yıkayın.

İkinci hacim salin verildiğinde, dağıtım kateteri tertibatını implante edilmiş kateterden ayırın ve implante edilen kateteri aseptik olarak kesmek ve ısıyla kapatmak için boruyu sıkıştırmak için bir çift çok sıcak, boncukla sterilize edilmiş diseksiyon forseps kullanın. Isı yalıtımlı kateteri bağ dokusuna sabitlemek için emilebilir monofilament sütürler kullanın ve ardından cildi kapatmak için emilmeyen dikişler kullanın. Daha sonra derideki kanı yıkamak için gazlı bez ve salin kullanın ve fareyi tam yaslanma olana kadar izleme ile ısıtılmış bir inkübatöre yerleştirin.