JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:33 dk. • August 7th, 2025
Besiyeri olan çok kuyulu bir plakada bir nöroblastom hücresi kültürü alın.
Oksidatif stresi indüklemek için kuyucuklardaki ortamı glikoz içermeyen nöronal ortamla değiştirin.
Plakayı, eşit pozlama için plazma jet nozulunun altına en uygun mesafede yerleştirin.
Seçilen kuyuları, kontrollü seviyelerde reaktif oksijen ve nitrojen türleri üreten düşük dozda helyum bazlı atmosferik basınçlı plazma jeti (APPJ) ile tedavi edin.
APPJ ile tedavi edilen kuyucuklarda stres-tepki yollarının aktivasyonuna ve antioksidan enzimlerin yukarı regülasyonuna izin vermek için hücreleri inkübe edin.
Glikoz yoksunluğu altında tedavi edilmeyen kuyucuklardaki hücreler daha fazla oksidatif hücresel hasara uğrar.
Hücre canlılığı tahlil reaktifi ekleyin ve inkübe edin. Canlı hücreler, reaktifi renkli bir ürüne indirger.
Bir mikroplaka okuyucu kullanarak renk yoğunluğunu ölçün.
APPJ ile muamele edilen kuyucuklar, daha yüksek hücre canlılığı nedeniyle artan renk yoğunluğu sergilerken, tedavi edilmemiş kuyucuklar daha düşük yoğunluk gösterir ve bu da glikoz yoksunluğu altında APPJ'nin nöroprotektif etkisini doğrular.
Işının kültür ortamı yüzeyine temas edebilmesini sağlamak için kuvars tüpün nozulu ile 96 oyuklu plakanın yerleştirileceği platform arasındaki mesafeyi üç santimetreye ayarlayın. Tedaviden önce, her bir oyuktaki kültür ortamını glikoz ortamı olmadan RPMI 1640'a değiştirin. Şimdi, plakayı atmosferik basınçlı plazma jet nozulunun altına yerleştirin. Daha sonra hücreleri 0, 1, 2, 4, 8 ve 12 saniye boyunca ayrı oyuklarda tedavi edin.
Tedaviden sonra, hücreleri 37 santigrat derecede bir hücre inkübatöründe bir saat inkübe edin, ardından her bir oyuğa 10 mikrolitre Hücre Sayma Kiti 8 çözeltisinde inkübe edin. Ardından, hücreleri dört saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Son olarak, bir mikroplaka okuyucu ile 450 nanometrede absorbansı ölçün.