Name: Cut-yükleme: Retina Nöronlar arasında Gap Junction Tracer Kaplin Kapsamı incelenmesi için yararlı bir araçtır (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Öğrenin, retinadaki nöronlar arasındaki gap junction kapsamını incelemek için cut-yükleme yöntemini. Bu teknik, aydınlatma koşulları altında elektriksel sinapsları değerlendirmeyi kolaylaştırır ve görsel işleme araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, CPR, SCM ve EY018640 NIH hibe EY005102 tarafından finanse edildi

1. Japon balığı, fare ve tavşan için bozulmamış nöral retina hazırlıkları <ol><li> Sürekli ortam (arka plan) aydınlatma altında açıklanan olanlar da dahil olmak üzere aşağıdaki adımları, "2) Cut-yükleme," gerçekleştirin. Bu protokolün amacı, prosedürleri (yani çok karanlık (yani "scotopic") koşulları altında ≤ 0.0001 lux) gece görüş kızıl ötesi gözlük kullanarak sürekli karanlıkta olarak gerçekleştirilen açıklanan, ancak diğer yüksek yoğunluk seviyeleri sürekli ortam aydınlatma, unutmayın gap junction tracer kaplin ortam aydınlatma diğer seviyelerde etkisini belirlemek için yerine kullanılabilir. </li><li> Koyu ameliyat öncesi en az 1 saat süreyle deneysel hayvan (Japon balığı, fare ve tavşan) uyum. </li><li> Daha önce 7 açıklanan derinden tricaine methanesulfonate (MS222 balık deposu su tamponlu (sodyum bikarbonat içeren) 150 mg / L) koyarak goldfish uyutmak ve derin ketamin (100 mg olan farelerin uyutmak/ Kg, ip) ve rompun (10 mg / kg, ip). Derinden üretan ile tavşan uyutmak (yükleme dozu: 2,0 g / kg, ip) ve aynı zamanda yerel intraorbital anestezi (2% Xylocaine) kullanımı, daha önce 8 tarif. Hayvanların bakım ve kullanımını içeren tüm deneysel işlemleri federal kurallarına uygun olarak yapılmalı ve yerel üniversite hayvan bakımı ve kullanımı komiteleri tarafından gözden geçirilmeli ve onaylanmalıdır. (Not: burada açıklanan deneyler, balıkların bakımı ve kullanımı ile ilgili tüm deneysel prosedürleri, fare ve tavşan NIH kılavuzunda uygun olarak yapıldı ve incelendi ve Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanan) </li><li> Balık, fare ve tavşan için, aşağıdaki enükleasyon, her gözün ön kısmını kaldırın. Daha sonra, filtre kağıdı, gözün arka bölümünün altında böylece, gözün arka kısmının üstüne filtre kağıdı bir parçası yerleştirin ve filtre kağıdı ve göz ters. Daha sonra, ince kullanarakforseps yavaşça, nöral retina, filtre kağıdı bağlı, birbirlerine bağlıdırlar pigment epiteli / koroid / sklera, uzak soyma sağlam nöral retina gözün arka bölümünü teşrih. Bunu yaparken, ince yaylı makas kullanılarak optik sinir kesti. Nöral retina, fotoreseptör tarafı odaklı kadar, filtre kağıdı bağlı ve göz geri kalanından ayrılmış olmalıdır. </li></ol> 2. Cut-yükleme <ol><li> Ile sürekli ortam (arka plan) aydınlatma (örneğin, çok karanlık (yani "scotopic") koşulları altında) altında 30 dakika için bir 6-iyi plaka (~ 5 ml / iyi) olarak ya da olmadan oksijenli Ringer Kullanıcı çözüm (Tablo 1) Batmak retina Bir test ilaç. Parafilm ile 6-iyi plaka mühürleme oksijenli içinde balık retina (5% CO 2 /% 95 O 2) 22 bikarbonat-tabanlı Zil ° C koruyun ve bir% 5 CO 36 ° C fare ve tavşan retina korumak 2 / 95% O <li> Ringer çözeltisi ile kesme retinanın hemen önce neurobiotin (% 0.5), bir biotinlenmiş molekülü eriterek izleme çözümü (genellikle 100 mcL) hazırlayın. % 0.5 rodamin dekstran (yüksek (&gt; 10.000) MW) çözüm olabilir. Yüksek molekül ağırlığı nedeniyle, rodamin dekstran gap junction ve sadece etiket kesim tarafından zarar görmüş hücreleri geçemez. Şekil. 3, bu yaralandı çünkü gap junction aracılığıyla difüzyon tracer birikmiş bu neurobiotin biriken hücreler ayırt etmek için bir yoldur. </li><li> Neurobiotin çözüm bir cam veya plastik Petri kabı yerleştirin, aşırı Zil kaldırmak neurobiotin çözümü bir jilet (ya da başka bir keskin bıçak) daldırma ve retinaya bağlı olduğu filtre kağıdı, kağıt havlu üzerine dokununn retina ve filtre kağıdı ile radyal bir kesim olun. Ayırıcılar Tercih edilmesi durumunda, retina ile yapılan kesme, ancak filtre kağıdı olduğunu kullanılmalıdır olabilir. Kesilen retina yüzeyine dik odaklı olmalıdır. Neurobiotin çözüm jilet tekrar batırın ve retina ikinci kez kesmek. Retinanın başına 4 kesim (bkz. Şekil 1) Bu kadar tekrarlayın. Fare ve diğer küçük retina aracılığıyla jilet keser yaparken bir diseksiyon mikroskobu kullanın. </li><li> Şekil. 6 plaka (5 ml Ringer / kuyu) kullanarak ya da test ilaçsız 1, batığın taze Ringer ortamda tekrar retina,. Retina, yükleme ve difüzyon izin vermek için 15 dakika süreyle inkübe edin. </li><li> 5 dakika, her taze Ringer orta ile veya test ilaçsız üç kez yıkayın. </li><li> % 4 paraformaldehid oda sıcaklığında 1 saat için 0.1 M fosfat tamponu (PBS, pH 7.4) ile retina sabitleyin. </li><li> 4 gecede 0,1 M PBS ile yıkayın ° C </li><li> Ertesi gün, tepki wi. 0.1M PBS streptavidin-Alexa 488 (son konsantrasyonu 10 mg / ml) +% 0.3 Triton X-100,% 2 ve 4 gecede tutmak ° C </li><li> 10 dakika her RT 0.1M PBS ile üç kez yıkayın </li><li> PBS, ince bir fırça kullanarak, retinaya sonra filtre kağıdı ayırmak ve bir slayt üzerine, retina, fotoreseptör-yüzü yukarı odaklı yerleştirin. </li><li> Yavaşça Vectashield montaj orta (Vector Laboratories, Burlingame, CA) ile monte edin. </li><li> Ölçüde, farklı deneysel koşullar (aydınlatma koşulları örneğin test ilaçlar) etkilerini karşılaştırmak böylece, deneysel her durum için aynı büyütme, çözünürlük ve ayarları konfokal mikroskobu (örneğin Zeiss 510 META) bir lazer tarama ile fotoğraf çekmek gap junction tracer kavrama (Şekil 2A-C ve Şekil 4A-C). Etiketli tüm hücreleri tek bir görüntü içeriyor olsa da, ilgi alanı z-yığını toplamak ve tek bir sözlük tavsiyegörüntü. </li></li></ol> 3. ImageJ kullanarak tracer kaplin Kantitasyonu <ol><li> LSM görüntü tarayıcısı, görüntüyü açmak, İHRACAT tıklayın ve dosya sıkıştırıldığında sonuçlanır TIF-16 bit olarak resmi kaydedin. Ölçek çubuğu bu TIF resim dahil edilmelidir. </li><li> NIH ImageJ yazılımı kullanarak, tüm montaj retina düşük büyütmeli görüntü Alexa-488-etiketli neurobiotin floresan yoğunluğu ölçmek. ImageJ yazılımını kullanarak, TIF dosyası açın ve ölçek çubuğuna karşılık düz bir çizgi çizin. ANALİZ SCALE SET ve bilinen bir mesafe ve uzunluk birimi girin, sonra Tamam'ı tıklatın. Şimdi ölçüm sonuçları bu milimetre olarak kalibre üniteleri, sunulabilir. </li><li> Dikdörtgen seçim aracını kullanarak ilgi alanı seçin. Floresan tepe seçim sol sınırında yerleştirilmelidir. Sağ sınırına yakın bir floresan sinyal olmadığından emin olun. Aksi takdirde, aktif (RESİM, sonra ROTATE) döndürün. </li><li> TıklayınANALİZ ve PROFİLİ ARSA. , Soldan sağa doğru bir üstel bozulma ile bir eğri göreceksiniz. </li><li> Pop-up penceresi KOPYA tıklayın ve EXCEL yapıştırın. Şimdi mesafenin bir fonksiyonu olarak kesme kesme (sol sütun) ve floresan (sağ sütun) mesafe gösteren iki sütun bakın. </li><li> Maksimum floresans değeri göreli floresan yoğunluğu elde etmek için her çiğ floresan değeri bölün. </li><li> Sonra kesme (X) ve (Y) göreli floresan mesafe karşılık gelen ve Kopyala iki sütun Kökeni yazılım içine yapıştırın. </li><li> Üstel bozulma şeklinde # 1 fonksiyonu (Şekil 2D ve Şekil 4D), Fit: Y = Y 0 + Y max * exp (-x / λ) Burada Y göreli floresan, Y o eşiğe, Y max maksimum bağıl floresan, λ space (uzunluk) sabit ve x kesim mesafedir. </li><li> T-testi veya ANOVA (Şekil 2E ve Şekil. 4E) kullanarak farklı deneysel koşullar altında uzay sabiti (λ) değerleri karşılaştırın. Not nicelikleme alternatif teknikler, başkaları 13,14 tarafından tarif edilmiştir . </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 2 ve 3 (balık) ve Şekil 4 (tavşan) yükleme kesim tarafından belirlenen kaplin fotoreseptör hücre tracer Temsilcisi örnekler sunulmuştur. Konfokal görüntüler kesim mesafe bir fonksiyonu olarak çizilen ve yukarıdaki No 3.8 'de gösterildiği üstel fonksiyonu ile donatılmış karşılaştırma (Şekil 2A-C ve Şekil 4A-C) ve floresan yoğunluğu için aynı ayarları kullanarak alındı (Şekil 2D ve Şekil 4D). Uzay her bir durum için sabit değerlergap junction tracer kaplin ölçüde kesilmiş yükleme tekniği kullanılarak sayısal olabileceğini gösteren, 2E, 4E Rakamlarla gösterilmiştir. Buna ek olarak, yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar. Gap junction tracer kaplin ölçüde nicel bir araç olarak yükleme kesim tekniği kullanın floresans şiddeti her durumda kesme mesafenin bir fonksiyonu olarak katlanarak azalır bulgu tarafından da doğrulanır (7,8 incelendiğinde de Şekil bakın. neurobiotin, diğer retina sitelerinden jilet kesim ve ile fotoreseptör girdiğinizi belirten 2D ve 4D) . Ayrıca, fotoreseptör hücre tracer kaplin niteliksel benzer gündüz / gece fark tek koniler tracer enjeksiyonları ile goldfish ve kesme yükleme 7 ile gözlenen fotoreseptör kaplin ölçüde ölçme nispeten doğru bir araç olarak kesilmiş yükleme çiziyor. Kesme-lretinanın elektriksel sinaps diğer türlerini araştırmak için ukleniyor tekniği de kullanılabilir. Örneğin, Şekil 5, A-tipi (Şekil 5A) ve B tipi (Şekil 5B) yatay hücreler tracer kaplin homolog sergileyen bu tavşan göstermektedir aşağıdaki cut-yükleme ve koyu adapte koşullar altında neurobiotin yayılması . <table border="1"><tbody><tr><td> Bileşik </td><td> Balık </td><td> Fare </td><td> Tavşan </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 130 </td><td> 120 </td><td> 117 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 20 </td><td> 25 </td><td> 30 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> - </td><td> 1 </td><td> 0,5 </td></tr><tr><td> KCL </td><td> 2,5 </td><td> 5 </td><td> 3,1 </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> 1 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td> - </td><td> 1 </td><td> 1,2 </td></tr><tr><td> Glutamin </td><td> - </td><td> 0,1 </td><td> 0,1 </td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> 0,7 </td><td> 2 </td><td> 2 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Zil çözümleri goldfish, fare ve tavşan retina Kompozisyon. Konsantrasyonlarda mM sunulmaktadır. Zil çözümleri kabarmış ve% 5 CO 2 /% 95 O 2 ile 22 ° C (balık) veya 36 ° C (memeliler) korunur. "-": Bu türler için Zil dahil değildir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3180/3180fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: cut-yükleme prosedürü gösteren akış şeması. İzolasyon o sonraf sağlam nöral retina, birkaç radyal ilk kez% 0.5 'lik neurobiotin çözeltisi batırılmış bir bıçak keser tarafından yapılmıştır. Retina tracer yükleme ve difüzyon inkübe ve sonra 0.1M fosfat tamponu (PB)% 4 paraformaldehid (PFA) ile tespit önce yıkandı. Tracer kaplin Alexa-488 streptavidin-konjuge kullanılarak incelenmiştir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3180/3180fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 goldfish fotoreseptör tracer kaplin gün-gece fark yükleme kesme tekniği ile ortaya çıkar. Fotoreseptör hücre gap junction neurobiotin tracer kaplin, kontrolü koşullar altında (A) gün içinde spiperone (10 mcM), seçici bir dopamin D 2 reseptör antagonisti (C) uygulaması sonrasında gece (B) ve gün içinde yoğun olduğunu, ancak . D) Normalize kesim mesafe (AC oklarla gösterilen) bir fonksiyonu olarak göreceli floresan yoğunluğu. E) Uzay sabit valD ve diğer deneyler (n = 4) veri elde ues. *** P &lt;0.001. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3180/3180fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 neurobiotin ve rodamin dekstran hem de bir çözüm ile kesme yükleme ertesi gece karanlık bir adapte goldfish retina fotoreseptör hücre tabakası floresans gösteren bir temsili örnek. Yüksek molekül ağırlıklı (&gt; 10.000 MW), sadece kesme yakın etiketli hücreleri nedeniyle açık gap junction kanalları aracılığıyla diffüz değildir rodamin dekstran (kırmızı ile gösterilen). Buna karşılık, gap junction dağılmıştır neurobiotin (yeşil renkte) ve fotoreseptör hücrelerin kesim uzak görülebilir. Kesim yeri her panelinde ok ile belirtilir. Ölçek çubuğu: 200 mm. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3180/3180fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 gün-gece farklı.tavşan retinada kaplin fotoreseptör tracer varlığı, kesme yükleme tekniği ile ortaya çıkar. Fotoreseptör hücre gap junction neurobiotin tracer kaplin, kontrolü koşullar altında (A) gün içinde spiperone (10 mcM) (C) uygulaması sonrasında gece (B) ve gün içinde yoğun olduğunu, ancak. AC, dik kesme yakın tavşan fotoreseptörlerin 3D rekonstrüksiyon kez gösterilmiştir. D) Normalize keser mesafenin bir fonksiyonu olarak göreceli floresan yoğunluğu. E) Uzay sabit değerler, D ve diğer deneyler (n = 3) verilerden elde edilmiştir. *** P &lt;0.001. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3180/3180fig5.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5 Kes yükleme koyu adapte tavşan yatay hücreler tracer birleştiğinde ortaya koymaktadır. A-tipi (A) ve B tipi (B) yatay koyu adapte tavşan retina hücreleri homolog neurobiotin tracer kaplin sergilenmektedir.

<ol><li>Bennett, M. V. L., Zukin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+coupling+and+neuronal+synchronization+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Electrical coupling and neuronal synchronization in the mammalian brain.</a> Neuron. 41, 495-511 (2004).</li>
<li>Connors, B. W., Long, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+synapses+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrical synapses in the mammalian brain.</a> Annu. Rev. Neurosci. 27, 393-418 (2004).</li>
<li>Vaney, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Many+diverse+types+of+retinal+neurons+show+tracer+coupling+when+injected+with+biocytin+or+Neurobiotin%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Many diverse types of retinal neurons show tracer coupling when injected with biocytin or Neurobiotin.</a> Neurosci. Lett. 125, 187-190 (1991).</li>
<li>Bloomfield, S. A., Völgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diverse+functional+roles+and+regulation+of+neuronal+gap+junctions+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The diverse functional roles and regulation of neuronal gap junctions in the retina.</a> Nat. Rev. Neurosci. 10, 495-506 (2009).</li>
<li>Weiler, R., Pottek, M., He, S., Vaney, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+coupling+between+retinal+horizontal+cells+by+retinoic+acid+and+endogenous+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res.+Brain.+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Modulation of coupling between retinal horizontal cells by retinoic acid and endogenous dopamine.</a> Brain. Res. Brain. Res. Rev. 32, 121-129 (2000).</li>
<li>Xin, D., Bloomfield, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nitric+oxide+on+horizontal+cells+in+the+rabbit+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of nitric oxide on horizontal cells in the rabbit retina.</a> Vis. Neurosci. 17, 799-811 (2000).</li>
<li>Ribelayga, C., Cao, Y., Mangel, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+circadian+clock+in+the+retina+controls+rod-cone+coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The circadian clock in the retina controls rod-cone coupling.</a> Neuron. 59, 790-801 (2008).</li>
<li>Ribelayga, C., Mangel, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+circadian+clock-controlled+neural+pathway+in+the+rabbit+retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identification of a circadian clock-controlled neural pathway in the rabbit retina.</a> PLoS One. 5, e11020-e11020 (2010).</li>
<li>Ouyang, X., Winbow, V. M., Patel, L. S., Burr, G. S., Mitchell, C. K., O'Brien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Kinase+A+mediates+regulation+of+gap+junctions+containing+connexin35+through+a+complex+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res.+Mol.+Brain.+Res%22%5BJournal%5D)">Protein Kinase A mediates regulation of gap junctions containing connexin35 through a complex pathway.</a> Brain. Res. Mol. Brain. Res. 135, 1-11 (2005).</li>
<li>Patel, L. S., Mitchell, C. K., Dubinsky, W. P., O'Brien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+gap+junction+coupling+through+the+neuronal+connexin+Cx35+by+nitric+oxide+and+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Commun.+Adhes%22%5BJournal%5D)">Regulation of gap junction coupling through the neuronal connexin Cx35 by nitric oxide and cGMP.</a> Cell. Commun. Adhes. 13, 41-54 (2006).</li>
<li>Peters, J. L., Cassone, V. M., Zoran, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+modulates+intercellular+communication+among+cultured+chick+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res%22%5BJournal%5D)">Melatonin modulates intercellular communication among cultured chick astrocytes.</a> Brain. Res. 1031, 10-19 (2005).</li>
<li>Cusato, K., Bosco, A., Rozental, R., Guimarães, C. A., Reese, B. E., Linden, R., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+mediate+bystander+cell+death+in+developing+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gap junctions mediate bystander cell death in developing retina.</a> J. Neurosci. 23, 6413-6422 (2003).</li>
<li>Li, H., Chuang, A. Z., O'Brien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+coupling+is+controlled+by+connexin+35+phosphorylation+in+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor coupling is controlled by connexin 35 phosphorylation in zebrafish retina.</a> J. Neurosci. 29, 15178-15186 (2009).</li>
<li>Mills, S. L., Massey, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinetics+of+tracer+movement+through+homologous+gap+junctions+in+the+rabbit+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The kinetics of tracer movement through homologous gap junctions in the rabbit retina.</a> Vis. Neurosci. 15, 765-777 (1998).</li>
<li>Mills, S. L., Massey, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+biotinylated+tracers+distinguishes+three+types+of+gap+junction+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A series of biotinylated tracers distinguishes three types of gap junction in retina.</a> J. Neurosci. 20, 8629-8636 (2000).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada açıklanan kesme yükleme yöntemi, gece ve gündüz farklı zamanlarda, farklı aydınlatma koşulları altında ve retinal nöronlar arasındaki boşluk kavşak tracer kaplin boyutunu belirlemek için kullanışlı ve basit bir tekniktir. Bu tekniğin avantajları arasında gece ve gündüz çeşitli aydınlatma koşulları altında sağlam retina dokusunda nöronlar arasındaki boşluğu kavşak tracer kaplin derecesini ölçmek için ve küçük çaplı somata birleştiğinde nöronlar için bunu yapmak için yeteneği dahil. Iki genel kategoriye ayrılır sağlam doku sonbaharda gap junction çalışma tekniği Sınırlamalar. İlk olarak, izli açık gap junction aracılığıyla difüzyon a) küçük çaplı ya da açık kanalları ve b) birleştiğinde hücresel bölmelerinin göreceli hacimleri 1,14,15 ile ilişkili ücret nedeniyle gözlemlemek için nispeten zor olabilir . Yani, küçük bir hücre birleştiğinde hücreleri daha büyük bir hücre ya da grup, comp tracer difüzyondaha büyük bir hücre daha küçük bir hücreye tracer difüzyon ared tracer seyreltme nedeniyle tespit etmek daha zor olabilir. İkincisi, bazı fizyolojik koşullar altında, sağlam doku gap junction tracer difüzyon yoluyla ölçüde doğru nispeten büyük tracer geçirgenliği ile karşılaştırıldığında, küçük bir elektrik akımı taşıyan iyonları iletkenliği farklılıklar nedeniyle boşluk junctional iletkenlik gücünü yansıtmıyor olabilir molekülleri 1,14,15. Tracer kaplin kanıt, genel olarak, güçlü bir şekilde işleyen, açık gap junction kanalları varlığını önerir, ancak bazı fizyolojik koşullar altında, tracer difüzyon elektrofizyolojik kayıtlar işleyişi, açık gap junction varlığını düşündürmektedir bile oluşmaz ya da gözlenebilir. Bu kesim yükleme tekniği, aynı zamanda merkezi sinir sistemi diğer bölgelerden gelen sağlam doku nöron arasındaki boşluğu kavşak tracer kaplin ölçüde araştırmak için kullanılabilir olması olası görünüyortem.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Tricaine metan sülfonat (MS222) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5040 </td><td> 150 mg / L, tamponlu balık tank su </td></tr><tr><td> Üretan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> U2500 </td><td> 2 g / kgloading doz </td></tr><tr><td> Çift Tüp Gece Görüş Gözlüğü </td><td> Gece Optik ABD </td><td> D-221 </td><td></td></tr><tr><td> Filtre Kağıdı, Sınıf No 4 </td><td> Whatman </td><td> 1004-090 </td><td></td></tr><tr><td> Güzel Forseps, 11 cm uzunluğunda Dumont No: 5, biologie </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11295-10 </td></tr><tr><td> Güzel Makas, yaylı, 8 mm bıçak, düz </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15025-10 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Neurobiotin </td><td> Vektör </td><td> SP-1120 </td><td> % 0.5 </td></tr><tr><td> Streptavidin-konjuge Alexa 488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11223 </td><td> % 2 </td></tr><tr><td> Dekstran rodamin (yüksek (&gt; 10.000) MW) </td><td> Invitrogen </td><td> D1817 </td><td> % 0.5 </td></tr><tr><td> Vectashield montaj orta </td><td> Vektör </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Zeiss 510 META Lazer Taramalı Konfokal Mikroskop </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> LSM-5 Image Browser 3,2,0,115 </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ImageJ Yazılım </td><td> NIH </td><td></td><td></td></tr><tr><td> OriginPro 8.0 </td><td> OriginLab Corp. </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cut-yükleme: retina nöronlar arasında gap junction tracer kaplin kapsamı incelenmesi için yararlı bir araçtır

Cut-loading: A Useful Tool for Examining the Extent of Gap Junction Tracer Coupling Between Retinal Neurons

Kimyasal sinaptik iletim ek olarak, gap junction bağlı nöronların elektrik sinaptik iletim yoluyla hızlı bir şekilde iletişim kurabilir. Giderek artan kanıtlar gap junction sadece elektrik akım ve birbirine bağlı veya birleştiğinde hücreleri arasındaki senkron faaliyet izni olduğunu gösterir, ancak birleştiğinde hücreleri arasındaki gücü veya elektrik iletişimin etkinliğini büyük ölçüde 1,2 modüle olabilir. Buna ek olarak, birçok gap junction kanalları büyük iç çapı (~ 1.2 nm), gap junction, metabolik ve kimyasal iletişim aracılık edebilir, böylece, hücre içi sinyal molekülleri ve birbirine bağlı hücreler arasındaki küçük metabolitleri difüzyon sadece elektrik akım izin verir, ancak . Nöron ve nörotransmitter ve diğer etkenlere göre modülasyon arasındaki junctional iletişim gücü birleştiğinde hücreleri aynı anda elektrikle kayıt ve t belirleyerek incelenecektir.iyontoforez tek hücre içine enjeksiyonu takiben GAP kavşak geçirgen tracer molekülleri, difüzyon ölçüde değil membran geçirgen. Ancak, bu işlemler, bozulmamış sinir dokusunda küçük somata nöronlar üzerindeki gerçekleştirmek için son derece zor olabilir. Her beş retina nöron tipi elektrikle gap junction 3,4 ile bağlı olduğundan, elektrik sinapslar ve elektrik iletişim modülasyon çok sayıda çalışmalar, gözdeki yapılmıştır . Artan kanıtlar, retina ışık stimülasyon ve değişiklikler sirkadiyen (24 saatlik) saat 3-8 kaplin boşluğu kavşak düzenlenmesi göstermiştir . Örneğin, yakın zamanda yapılan çalışmalar göstermiştir retina sirkadiyen saat, gün boyunca, artan dopamin D2 reseptör aktivasyonu ile D2 reseptör aktivasyonu azaltarak çubuk ve koni fotoreseptör hücreleri arasındaki kavşak kaplin azalır ve dramatik bir gece çubuk koni kaplin artar <sup&gt; 7,8. Ancak, sadece sağlam nöral retina dokusunun küçük somata nöronlar üzerinde gerçekleştirmek için bu çalışmalar son derece zor, ama yeterince boşluk kavşak ışık bağlı değişiklikleri önlemek için tek bir retina nöronlarının elektrofizyolojik çalışma sırasında aydınlatma koşullarını kontrol etmek zor olabilir iletkenlik. Burada, gece ve gündüz farklı zamanlarda, farklı aydınlatma koşulları altında ve retinal nöronlar arasındaki boşluk kavşak tracer kaplin ölçüde belirleyen basit bir yöntem mevcut. Bu kesim yükleme tekniği açık gap junction kanalları aracılığıyla boya yükleme ve difüzyon dayalı kazıma yükleme değişiklik, 9-12. Pençe yükleme kültür hücreleri sağlam retina gibi kalın dilim iyi çalışır, değil. Yükleme kesim tekniği bozulmadan balık ve memeli retina 7, 8,13 fotoreseptör kaplin çalışma olmuştur arasındaki kaplin incelemek için kullanılabilirburada açıklandığı gibi diğer retinal nöronların.

Retinal nöronlar arasındaki boşluk kavşak tracer kaplin kapsamını belirlemek için kolay ve kullanışlı bir yöntem açıklanmıştır. Bu teknik, bir gece ve gündüz farklı zamanlarda farklı aydınlatma koşulları altında ve sağlam retina nöronlar arasındaki elektriksel sinaps işlevini incelemek için olanak sağlar.

Cut-yükleme: Retina Nöronlar arasında Gap Junction Tracer Kaplin Kapsamı incelenmesi için yararlı bir araçtır

Kimyasal sinaptik iletimin yanı sıra, gap junctionlar (boşluk bağlantıları) aracılığıyla birbirine bağlanan nöronlar, elektriksel sinaptik iletim yoluyla da hızlı bir şekilde iletişim kurabilirler...

Aşağıdaki kesim yükleme deneyinin genel amacı, kontrollü aydınlatma koşulları altında, sağlam retina üzerindeki nöronlar arasındaki gap junction (boşluk bağlantısı) izleyici eşleşmesinin derecesini incelemektir. İlk adım, retinaların; açık gap junction kanallarından difüze olabilen ancak hücre membranlarından geçemeyen bir izleyici molekül olan nörobiyotin çözeltisine batırılmış keskin bir bıçakla kesilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda retinalar, izleyicinin açık gap junction kanallarından difüzyonuna izin veren Ringer çözeltisinde inkübe edilir.Gap junction kenetlenmesi zayıfsa, nörobiyotin floresansı kesiğe yakın olan retinal nöronlarla sınırlı kalacaktır. Buna karşılık, gap junction kenetlenmesi güçlüyse, floresans kesikten uzaktaki retinal nöronlarda da tespit edilecektir. Kesi yoluyla yüklemenin mevcut tekniklere göre temel avantajı, sağlam nöral retinal dokudaki küçük hücre gövdeli nöronlarda uygulanmasının daha kolay olmasıdır.Ayrıca, kesit yükleme sırasındaki aydınlatma koşullarını kontrol etmek, sağlam retinal dokudaki tekil nöronların elektrofizyolojik çalışmasına kıyasla daha kolaydır. Elektriksel kayıt sırasında kullanılan ışık uyaranlarının kendileri gap junction kenetlenmesinde değişikliklere yol açabildiğinden, tekniği laboratuvarımdan bir doktora sonrası araştırmacı olan Dr. Chu Choi uygulamaktadır. Bu prosedürde, bir japon balığı cerrahi işlemden önce gündüz vakti en az bir saat boyunca sürekli karanlıkta tutulur ve retinal doku fikse edilene kadar takip eden tüm adımlar da gündüz vakti sürekli karanlıkta gerçekleştirilir; akvaryum suyuna litre başına 150 miligram metan sülfonat ekleyerek japon balığı derin şekilde anestezi edilir.Ardından, federal ve üniversite kılavuzlarına uygun olarak japon balığını sakrifiye edin ve göz kürelerini dikkatlice çıkarın. Sonra, her bir göz küresinin anterior kısmını uzaklaştırın. Daha sonra, gözün posterior kısmının üzerine bir parça filtre kağıdı yerleştirin ve filtre kağıdı gözün posterior kısmının altında kalacak şekilde filtre kağıdını ve gözü ters çevirin.Şimdi, karanlığa adapte edilmiş japon balığının sklera ve pigment epitelyumunu içeren göz arka kısmını nazikçe çıkarın. Optik siniri ince uçlu bir makasla kesin. Gözün arka kısmından sağlam nöral retina diseksiyonu yapıldıktan sonra, fotoreseptör tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirilen nöral retina, enükleasyon öncesinde filtre kağıda sabitlenmelidir; bu sırada balık, altı kuyucuklu bir plakanın her bir kuyucuğuna eklenen, test ilacı içeren veya içermeyen 5 mL karbonat bazlı ringer çözeltisi ile oksijenlendirilmiş ortamda anestezi altında tutulmalıdır.Retinaları sürekli karanlık ortamda kuyucuklara aktarın. Ardından kuyucukları paraform ile mühürleyin ve dokuyu 30 dakika boyunca inkübe edin. Retinayı kesmeden hemen önce, %0,5 neuro biotin'i ringer solüsyonunda çözerek 100 µL izleyici solüsyon hazırlayın.Ardından, neuro biotin solüsyonunu cam bir petri kabına ekleyin. Daha sonra, retinanın bağlı olduğu filtre kağıdını bir kağıt havlu üzerine hafifçe vurun. Fazla ringers çözeltisini uzaklaştırmak için, bir jilet ucunu neuro biotin solüsyonuna batırın ve retina ile filtre kağıdı boyunca dik bir radyal kesik oluşturun.Ardından, jilet ucunu tekrar nöro biotin çözeltisine daldırın ve retinayı ikinci kez kesin. Bu işlemi retina başına dört kese kadar tekrarlayın. Bu aşamada, yüklenme ve difüzyona izin vermek için retinayı 15 dakika boyunca test ilacı içeren veya içermeyen taze Ringer ortamına aktarın.Retinayı, her biri beş dakika sürecek şekilde, test ilacı içeren veya içermeyen taze Ringer ortamı ile üç kez yıkayın. Ardından retinayı, oda sıcaklığında bir saat boyunca 0,1 molar fosfat tampon çözeltisi içindeki %4 paraformaldehit ile fikse edin. Sonrasında retinayı, buzdolabına yerleştirerek dört santigrat derecede gece boyunca 0,1 molar PBS ile yıkayın ve ertesi gün çıkarın.Retinayı, 0.1 molar PBS ve 0.3% Triton X 100 içerisinde, nihai konsantrasyonu 10 micrograms per milliliter olacak şekilde %2 streptavidin Alexa 4 88 ile reaksiyona sokun ve dört degrees Celsius'ta gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, retinayı oda sıcaklığında, her seferinde 10 dakika boyunca üç kez 0.1 molar PBS ile yıkayın.Retinayı PBS içerisinde filtre kağıdından ayırın. Ardından ince bir fırça kullanarak, retinayı fotoreseptör tarafı yukarı gelecek şekilde vector shield montaj medyumu ile bir lama monte edin. Lamı bir lazer taramalı konfokal mikroskoba aktarın ve farklı deneysel koşulların gap fonksiyonel izleyici kenetlenme derecesi üzerindeki etkilerinin karşılaştırmaları yapılabilmesi için her deneysel koşul için aynı büyütme çözünürlüğü ve ayarlarda fotoğraflar çekin.Burada, sabit karanlıkta gündüz saatlerindeki fotoreseptör hücre takipçisi eşleşmesinin kapsamı, seçici bir dopamin D2 reseptör antagonistinin varlığında sabit karanlıkta gündüz saatleri ile karşılaştırılmıştır. Her iki görüntüde de jilet kesiğinin solda olduğuna dikkat edin. Tek bir görüntü işaretli hücrelerin tamamını içerebilse de, ilgi duyulan bölgenin bir Z yığınının toplanması ve gösterilen tek bir görüntüye dönüştürülmesi önerilir.Bu tür bir Zack boyunca ardışık olarak ilerledikçe fotoreseptör hücre izleyici kuplajının kapsamı burada görülmektedir. Bu görüntüdeki jilet kesiğinin sağ tarafta olduğuna dikkat edin. LSM görüntü tarayıcısındaki izleyici kuplajı kapsamını nicelleştirmek için görüntüyü açın, ardından dışa aktar'a tıklayın ve resmi sıkıştırılmamış 16 bitlik bir TIF dosyası olarak kaydedin; ölçek çubuğu, NIH Image J yazılımı kullanılarak bu TIFF görüntüsüne dahil edilmelidir.Delik montajlı retinaların düşük büyütmeli görüntülerinden Alexa 4 88 ile işaretlenmiş nörobiyotin floresan yoğunluğunu ölçün. Image J yazılımını kullanarak TIFF dosyasını açın ve ardından ölçek çubuğuna karşılık gelen düz bir çizgi çizin. Sonrasında, analyze menüsünden set scale seçeneğine gidin ve bilinen mesafeyi ve uzunluk birimini girin.Ardından tamam'a tıklayın. Artık floresan ölçümleri milimetre gibi kalibre edilmiş birimlerle sunulabilir. Bunun ardından, dikdörtgen seçim aracını kullanarak ilgilenilen alanı seçin.Floresan piki, seçiminizin sol sınırına konumlandırılmalıdır. Sağ sınır yakınında floresan sinyali olmadığından emin olun. Sabit karanlıkta elde edilen gündüz kontrol verileri için analyze and plot profile seçeneğine tıklayın.Soldan sağa doğru eksponansiyel azalma gösteren bir eğri görüntülenmektedir. Ardından açılır pencerede kopyala (copy) seçeneğine tıklayın ve bunu Excel'e yapıştırın. Şu an, biri kesim noktasından olan uzaklığı, diğeri ise floresan yoğunluğunu kesim noktasından olan uzaklığın bir fonksiyonu olarak gösteren iki sütun bulunmaktadır.Kıyaslama amacıyla, yukarıdaki adımlar gündüz vakti sürekli karanlıkta elde edilen verilerle tekrarlanır. spit bro varlığında, bağıl floresan yoğunluğunu elde etmek için her bir ham floresan değerini maksimum floresan değerine bölün. Kesim noktasına olan mesafe ve bağıl floresan yoğunluğuna karşılık gelen iki sütunu kopyalayın ve ardından bunları origin yazılımına yapıştırın.Bu adımlar hem gündüz kontrolü hem de gündüz tükürüğü için gösterilmiştir. Bu noktadaki çalışma verilerini, eksponansiyel azalma bir numaralı fonksiyonu ile uydurun; farklı deneysel koşullardaki uzay sabiti değerlerini bir T-testi veya Inova kullanarak karşılaştırın.Karşılaştırma amacıyla gündüz kontrol, gündüz pip rone ve gece kontrol verilerinin eksponansiyel fonksiyonları ve istatistiksel analizleri gösterilmektedir. Burada; kesim yükleme tekniği ile ortaya konduğu üzere, karanlığa adapte edilmiş Japon balığı retinasındaki fotoreseptör hücre izleyici eşleşmesinin gündüz A, gece B ve gündüz seçici bir dopamin D iki reseptör antagonisti olan one varlığındaki durumuna dair örneklere yer verilmiştir. Tüm konfokal görüntüler, karşılaştırma yapabilmek için aynı ayarlar kullanılarak alınmıştır.Bu grafikte, üç farklı deneysel koşul için floresans yoğunluğu, kesim noktasından olan uzaklığın bir fonksiyonu olarak çizilmiş ve eksponansiyel fonksiyon ile fit edilmiştir. Burada üç deneysel koşul için gösterildiği gibi, uzay sabiti değerleri hesaplanarak gap junctional tracer eşleşmesinin derecesini belirlemek için kesim yükleme tekniği kullanılmıştır. Kesim yükleme tekniği, retinadaki diğer hücre tipleri arasındaki veya diğer türlerdeki elektriksel sinapsları incelemek için de kullanılabilir.Örneğin, bu iki şekil, tavşandaki A tipi ve B tipi yatay hücrelerin, karanlığa adapte edilmiş koşullar altında kesme yüklemesi ve nörobiyotin difüzyonunun ardından homolog izleyici eşleşmesi sergilediğini göstermektedir. Çubuk ve koni hücreleri arasındaki gap junction'lar aracılığıyla izleyici difüzyonunun gece ve gündüz gerçekleşme derecesini incelemek için kesme yüklemesi tekniğini kullandık. Ayrıca bu teknik, diğer retinal nöronlar arasındaki izleyici eşleşmesinin retinal saat tarafından ve/veya spesifik ışık-karanlık koşulları tarafından kontrol edilip edilmediğini belirlemek için kullanılabilir.Ayrıca, diğer beyin bölgelerindeki nöronlar arasındaki izleyici eşleşmesini incelemek için de kullanılabilir.

cut-loading-useful-tool-for-examining-extent-gap-junction-tracer

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu protokol, ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısını ölçmek için nasıl ayrıntıları. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar.

Sinapslar miktarının: Synapse Numarası ölçmek için bir İmmünositokimya tabanlı Testi

Burada elektrofizyoloji ve Ca2 + görüntüleme için uygun agar-gömülü retina dilim hazırlanması için bir protokol. Bu yöntem, tek presinaptik sinir uçları doğrudan patch-klemp kayıtları kullanarak retina mikrodevreler şerit-tip sinaps bir çalışma sağlar.

Patch-kelepçe Kapasitans Ölçümler ve Ca 2 + Retina Dilimleri Tek Sinir Terminalleri Görüntüleme

Biz nöron veya polietilen emme pipet kullanarak herhangi bir nöronal yoluna floresan ve kalsiyum duyarlı boyalar yüksek konsantrasyon tanıtmak için basit ve düşük maliyetli tekniği tanımlandı.

Sinirler, yolları ve Floresan Boyalar ile Spinal Roots Retrograd Yükleniyor

İmmünohistokimya protokolleri retinada, spesifik bir proteinin lokalizasyonu incelemek için kullanılır. Kalsiyum görüntüleme teknikleri retina ganglion hücrelerinin ve bunların akson kalsiyum dinamiklerini incelemek için istihdam edilmektedir.

Wholemount Sıçan Retina Immunohistochemical ve Kalsiyum Görüntüleme Yöntemleri

Bu sunum, hücreler iletken ve şeffaf indiyum-kalay oksit ile kaplanmış bir slayt üzerinde büyürken, hücreler arası, kavşak iletişiminin incelenmesi için yapışık, kültürlenmiş hücrelerin elektroporasyonunun kullanıldığı bir yöntemi göstermektedir.

Gap Kavşak Sınavı Fonksiyonel Testi; İndiyum-Kalay Oksit Yapışık hücrelerin elektroporasyonu

Bu protokol gap junction kanalları aracılığıyla arası iletişimi ölçen bir neşter yükleme-floresan boya aktarımı teknik anlatılmaktadır. Gap Junctional hücrelerarası iletişim doku homeostazı korunur ve bu hücre sinyal bozulması olumsuz sağlık etkileri vardır edildiği önemli bir hücresel bir süreçtir.

Gap Junctional Hücreler arası iletişim: Doğal Ürünler Toksikantların ve Toksinler Yan Etkileri değerlendirmek için Fonksiyonel Biyomarker ve Sağlık Faydaları

Bu protokol, düz monte hazırlık retina nöronlar üzerinde tüm hücre yama kelepçe kayıt yapmak gösterilmiştir.

Deafferentated Fare Retina bir düz montaj Hazırlık patlaması amacrine hücreleri Yama Kelepçe Kaydı

Burada, sinir uçlarına kurbağa sinir kütüğünden kalsiyuma duyarlı bir boya yüklemek için bir yöntem açıklıyoruz. Ayrıca, periferik sinir uçlarında hızlı kalsiyum geçişlerinin kaydedilmesi ve analizi için bir protokol de sunuyoruz.

Kurbağa Sinir Uçlarına Sinir Kütüğü Vasıtasıyla Kalsiyum Boyası Yükleme: Kurbağa Nöromüsküler Kavşağında Kalsiyum Geçici Kayıt

Burada astrositik ağlar organizasyonu değerlendirmek için bir protokol mevcut. Açıklanan yöntemi hücre sayısı, boyutu, alan ve bir çekirdek içinde pozisyon gibi bu ağların açıklayıcı ölçüleri sağlamak için önyargı en aza indirir. Anizotropi vektörel bir analizi ile değerlendirilir.

Boyut, şekil ve yön ağlar yönetim eşleşmiş Astrocytes analiz

Burada, gap junction oransal kimyasal ilaç bulma ve toksikolojik değerlendirme için yüksek üretilen iş filtreleme için tasarlanmış bir roman gap junction hücreler arası iletişim tahlil için bir iletişim kuralı mevcut.

Bir iyodür-Sarı floresan Protein-Gap Junction hücreler arası iletişim tahlil

Bu çalışma, fotoreseptör hücre gövdelerinin çıkarılmasının daha hızlı antikor difüzyonu ve immünohistokimya, in situ hibridizasyon ve elektrofizyoloji deneyleri için iç retinal nöronlara gelişmiş yama pipet erişimi sağladığı alternatif bir düz montajlı retina preparatı sunmaktadır.

Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina

Öğrenin, retinadaki nöronlar arasındaki gap junction kapsamını incelemek için cut-yükleme yöntemini. Bu teknik, aydınlatma koşulları altında elektriksel sinapsları değerlendirmeyi kolaylaştırır ve görsel işleme araştırmalarına katkı sağlar.

Cut-yükleme: Retina Nöronlar arasında Gap Junction Tracer Kaplin Kapsamı incelenmesi için yararlı bir araçtır

Daha fazla video keşfet