Bir konumlandırma cihazı kullanılarak siRNA'nın fare beynine intranazal iletimi

Anestezi uygulanmış farelerin, sırtları sandalyenin sırt desteğine paralel ve koltuğa dik olacak şekilde bir konumlandırma cihazına yerleştirilmesiyle başlayın.

Fareler baş aşağı ve ileri pozisyonda konumlandırılır ve sandalye kemerleri kullanılarak sabitlenir.

Nöron hedefli bir peptit-siRNA kompleksi ile yüklü bir mikropipet kullanarak, bir burun deliğinin yanına bir damla yerleştirin ve farenin çözeltiyi doğal olarak solumasına izin verin.

Solüsyonun akciğerlere akmasını önlemek için soluma sırasında farenin başını hafifçe aşağı doğru bastırın.

Kısa bir süre duraklayın, ardından uygulamayı diğer burun deliğinde tekrarlayın.

Kalan fareler için prosedürü tekrarlayın.

Kompleks, burun mukozasına nüfuz eder, buradan koku alma ve trigeminal sinirlere girer ve beyne ulaşmak için bunların içinden geçer.

Beynin içinde, kompleks nöronal reseptörlere bağlanır, endositoza uğrar ve hücre içi siRNA iletimini kolaylaştırır.

siRNA, hedef mRNA'ya bağlandıktan sonra gen susturulmasını indükleyen RISC kompleksinin bir parçası haline gelir.

Bu işleme başlamak için, cerrahi düzlemi korumak için farelerin iki ayaklı refleksinin anestezi seviyesini değerlendirin. Ardından, gerekli tüm reaktiflere kolay erişim sağlamak için konumlandırma cihazını uygun bir mesafe ve yüksekliğe yerleştirin.

Sonra hayvanın gözlerine merhem sürün. Bir fareyi sandalye kemerleriyle bağlayın, farenin ön ayaklarının herhangi bir rahatsızlık vermeden rahat bir pozisyondayken doğal destek sağladığından emin olun. Kalan fareler için prosedürleri tekrarlayın. Her bir fareyi, sırtını sandalyenin sırt desteğine paralel ve sandalye koltuğuna 90 derece açıyla yatırarak belirlenen sandalyeye nazikçe yerleştirin.

Hayvanın itmeden veya bastırmadan doğal olarak baş aşağı ve ileri pozisyonda yatmasına izin verin. Tüm fareler bağlandıktan sonra hemen burun içi aşılamaya başlayın. Burun içi doğumu gerçekleştirmek için mikropipeti 2 mikrolitre RVG9R-siRNA kompleks solüsyonu ile doldurun. siRNA'yı uygularken kontrolsüz hareketlerden kaçınmak için pipeti baskın elinizde tutun ve diğer elinizle destekleyin.

Farenin doğrudan soluyabilmesi için bir burun deliğine çok yakın yaklaşık 2 mikrolitrelik bir damlacık yerleştirin. Küçük bir damla kolayca oluşmuyorsa, pipet ucunu yenisiyle değiştirin ve işlemi tekrarlayın. Nefes alırken fare kafasını işaret parmağınızla 5 saniye boyunca yavaşça aşağı doğru itin ve konumunu koruyun.

İlacın akciğerlere boşalmasını önlemek için, fare nefes alırken fare kafasını işaret parmağıyla 5 saniye boyunca hafifçe aşağı itmek önemlidir.

İlk farenin ikinci kısrağına aşılamayı zamanlamak için bundan üç ila dört dakika sonra bir kronometre başlatın. Bu zaman aralığı, farenin ilk dozun solunmasını tamamlaması ve normal solunumu geri kazanması için gereklidir. İlk farede alternatif burunların aşılanması arasındaki üç ila dört dakikalık aralıkta, cihaza yerleştirilen kalan üç farenin her birinde bir nare'nin intranazal aşılaması tamamlayın.

Kronometre çaldığında, ikinci burun deliğini ilk fareye aşılayın ve diğer fareler için yukarıdaki işlemi tekrarlayın. Dört farenin tümü için 20 ila 30 mikrolitre verilene kadar işlemi tekrarlayın. Tüm aşılama prosedürünün tamamlanması yaklaşık 30 ila 45 dakika sürecektir. Hayvanları belirlenen kafeslerine geri koyun. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar fareleri gözetimsiz bırakmayın.