Epifloresan Mikroskopi Kullanılarak Genikülat Ganglion Nöron Yanıtlarının İn Vivo Görüntülenmesi

Tat işleyen periferik nöronlardan oluşan bir küme olan cerrahi olarak maruz kalan bir genikülat ganglion ile anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.

Bu nöronlar, kalsiyum bağlanması üzerine floresan veren bir kalsiyum göstergesi olan GCaMP'yi ifade eder.

Net görselleştirme için gangliyonu kaplayan herhangi bir sıvıyı çıkarın.

Fareyi mikroskop altında emici bir ped üzerine yerleştirin ve anatomik yer işaretlerini kullanarak genikülat ganglionu bulun.

Epifloresan kapsamı üzerinde uygun bir filtre kullanarak, GCaMP eksprese eden nöronlardan gelen yeşil floresansı tespit edin.

Ardından, tastant dağıtım tüpüne bağlı bir dağıtım iğnesini farenin ağzına sokun ve tastandı verin.

Tastant, tat reseptör hücrelerini uyararak, ganglion nöron reseptörlerine bağlanan ve kalsiyum akışını tetikleyen ATP'yi serbest bırakır.

Bu kalsiyum iyonları GCaMP'lere bağlanarak floresan emisyonuna neden olur.

Kamerayı mikroskobun görüş alanıyla hizalayın ve floresan değişiklikleri yoluyla gerçek zamanlı nöronal aktiviteyi yakalamak için video kaydını sabit iletimle senkronize edin.

Tastant panelini çalıştırmak için, sıvıyı genikülatın üzerinden çıkarmak için emme kullanın ve fareyi diseksiyon mikroskobu altında emici bir ped üzerine yerleştirin. Genikülat ganglionu bulmak için bülde kalan deliği, temporal kemikteki deliği ve yedinci siniri kullanın. Ve bireysel GCaMP eksprese eden genikülat ganglion nöronlarını kontrol etmek için epifloresan kapsamındaki FITC/GFP filtresini kullanın. Dağıtma iğnesini bir sabit çizgi için hayvanın ağzına sıkıca yerleştirin. Video kaydının başlangıcını sunum sunumunun başlangıcıyla senkronize edin, yanıtlar için canlı yayını izleyin.