Name: Klonal Genişleme CD133 + Karaciğer Kök Hücre İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 6 s
Description: Öğrenin, kronik karaciğer hasarı sonrası fare karaciğerinden CD133 pozitif karaciğer kök hücrelerinin izolasyonu ve klonal genişlemesi için akış sitometrisi kullanarak tek hücre analizi yapmayı.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dr Rountree Çocuk Miracle Network, Ulusal Sağlık Enstitüsü, K08DK080928 ve R03DK088013 ve Amerikan Kanser Derneği Araştırmacı Ödülü, MGO-11651 akımı desteğini onaylar. Dr Rountree Pediatrik Scientist Kalkınma Programı (NICHD Hibe Ödülü K12-HD00850) tarafından finanse yaparken bu işlemi başlangıçta geliştirilmiş ve rafine edilmiş olduğunu kabul eder.

<ol><li>Rountree, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25, 2419-2429 (2007).</li>
<li>Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133%2B+liver+cancer+stem+cells+from+methionine+adenosyl+transferase+1A-deficient+mice+demonstrate+resistance+to+transforming+growth+factor+%28TGF%29-beta-induced+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">CD133+ liver cancer stem cells from methionine adenosyl transferase 1A-deficient mice demonstrate resistance to transforming growth factor (TGF)-beta-induced apoptosis.</a> Hepatology. 49, 1277-1286 (2009).</li>
<li>Rountree, C. B., Ding, W., He, L., Stiles, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+CD133-expressing+liver+cancer+stem+cells+in+liver-specific+phosphatase+and+tensin+homolog+deleted+on+chromosome+10-deleted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Expansion of CD133-expressing liver cancer stem cells in liver-specific phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10-deleted mice.</a> Stem Cells. 27, 290-299 (2009).</li>
<li>Rountree, C. B., Senadheera, S., Mato, J. M., Crooks, G. M., Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+liver+cancer+stem+cells+during+aging+in+methionine+adenosyltransferase+1A-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Expansion of liver cancer stem cells during aging in methionine adenosyltransferase 1A-deficient mice.</a> Hepatology. 47, 1288-1297 (2008).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> J. Cell. Physiol. 213, 286-300 (2007).</li>
<li>Fausto, N., Campbell, J. S., Riehle, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Hepatology. 43, 45-53 (2006).</li>
<li>Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+Stem+Cells.+III.+Emergent+themes+of+liver+stem+cell+biology%3A+niche%2C+quiescence%2C+self-renewal%2C+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal Stem Cells. III. Emergent themes of liver stem cell biology: niche, quiescence, self-renewal, and plasticity.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 290, 189-193 (2006).</li>
<li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+liver+repopulating+capacity+of+murine+oval+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">The origin and liver repopulating capacity of murine oval cells.</a> Proc Natl Acad Sci U. S. A. 100, 11881-11888 (2003).</li>
<li>Greenbaum, L. E., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+stem+cells+in+liver+repair+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of stem cells in liver repair and fibrosis.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 43, 222-229 (2011).</li>
<li>Choi, S. S., Omenetti, A., Syn, W. K., Diehl, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Hedgehog+signaling+in+fibrogenic+liver+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biochem.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of Hedgehog signaling in fibrogenic liver repair.</a> Int. J. Biochem. Cell. Biol. 43, 238-244 (2011).</li>
<li>Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scopolamine+treatment+and+muscarinic+receptor+subtype-3+gene+ablation+augment+azoxymethane-induced+murine+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Scopolamine treatment and muscarinic receptor subtype-3 gene ablation augment azoxymethane-induced murine liver injury.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 333, 639-649 (2010).</li>
<li>Sell, S., Leffert, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Liver cancer stem cells.</a> J. Clin. Oncol. 26, 2800-2805 (2008).</li>
<li>Lee, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+prognostic+subtype+of+human+hepatocellular+carcinoma+derived+from+hepatic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">A novel prognostic subtype of human hepatocellular carcinoma derived from hepatic progenitor cells.</a> Nat. Med. 12, 410-416 (2006).</li>
<li>Sell, S., Dunsford, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+the+stem+cell+origin+of+hepatocellular+carcinoma+and+cholangiocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Evidence for the stem cell origin of hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma.</a> Am. J. Pathol. 134, 1347-1363 (1989).</li>
<li>Amin, R., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+stem+cells+and+tgf-Beta+in+hepatic+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Liver stem cells and tgf-Beta in hepatic carcinogenesis.</a> Gastrointest Cancer Res. 2, 27-30 (2008).</li>
<li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor%2Fstem+cells+give+rise+to+liver+cancer+due+to+aberrant+TGF-beta+and+IL-6+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Progenitor/stem cells give rise to liver cancer due to aberrant TGF-beta and IL-6 signaling.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 2445-2450 (2008).</li>
<li>Kitisin, K., Pishvaian, M. J., Johnson, L. B., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+stem+cells+and+molecular+signaling+pathways+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Liver stem cells and molecular signaling pathways in hepatocellular carcinoma.</a> Gastrointest Cancer Res. 1, 13-21 (2007).</li>
<li>Rountree, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+fails+to+differentiate+into+liver+epithelium+during+murine+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Bone marrow fails to differentiate into liver epithelium during murine development and regeneration.</a> Hepatology. 45, 1250-1260 (2007).</li>
<li>Shimano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+oval+cells+have+the+side+population+phenotype+defined+by+expression+of+ATP-binding+cassette+transporter+ABCG2%2FBCRP1%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Hepatic oval cells have the side population phenotype defined by expression of ATP-binding cassette transporter ABCG2/BCRP1.</a> Am J Pathol. 163, 3-9 (2003).</li>
<li>Suzuki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+isolation+and+clonal+identification+of+self-renewing+bipotent+hepatic+progenitor+cells+in+adult+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric isolation and clonal identification of self-renewing bipotent hepatic progenitor cells in adult mouse liver.</a> Hepatology. , (2008).</li>
<li>Suzuki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+identification+and+characterization+of+self-renewing+pluripotent+stem+cells+in+the+developing+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Clonal identification and characterization of self-renewing pluripotent stem cells in the developing liver.</a> J Cell Biol. 156, 173-184 (2002).</li>
<li>Yamashita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpCAM-positive+hepatocellular+carcinoma+cells+are+tumor-initiating+cells+with+stem%2Fprogenitor+cell+features%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features.</a> Gastroenterology. 136, 1012-1024 (2009).</li>
<li>Yamashita, T., Budhu, A., Forgues, M., Wang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+hepatic+stem+cell+marker+EpCAM+by+Wnt-beta-catenin+signaling+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Activation of hepatic stem cell marker EpCAM by Wnt-beta-catenin signaling in hepatocellular carcinoma.</a> Cancer Res. 67, 10831-10839 (2007).</li>
<li>Furuyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver%2C+exocrine+pancreas+and+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43, 34-41 (2011).</li>
<li>Kordes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133%2B+hepatic+stellate+cells+are+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">CD133+ hepatic stellate cells are progenitor cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 352, 410-417 (2007).</li>
<li>Berg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+Growth+Factor+10+is+critical+for+liver+growth+during+embryogenesis+and+controls+of+hepatoblast+survival+via+b-catenin+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fibroblast Growth Factor 10 is critical for liver growth during embryogenesis and controls of hepatoblast survival via b-catenin activation.</a> Hepatology. , (2007).</li>
<li>Turner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+hepatic+stem+cell+and+maturational+liver+lineage+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Human hepatic stem cell and maturational liver lineage biology.</a> Hepatology. 53, 1035-1045 (2011).</li>
<li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+restriction+of+human+hepatic+stem+cells+to+mature+fates+is+made+efficient+by+tissue-specific+biomatrix+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Lineage restriction of human hepatic stem cells to mature fates is made efficient by tissue-specific biomatrix scaffolds.</a> Hepatology. 53, 293-305 (2011).</li>
<li>Galicia, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+hepatic+tumor+progenitor+cells+in+Pten-null+mice+requires+liver+injury+and+is+reversed+by+loss+of+AKT2%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Expansion of hepatic tumor progenitor cells in Pten-null mice requires liver injury and is reversed by loss of AKT2.</a> Gastroenterology. 139, 2170-2182 (2010).</li>
<li>Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-to-mesenchymal+transition+of+murine+liver+tumor+cells+promotes+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Epithelial-to-mesenchymal transition of murine liver tumor cells promotes invasion.</a> Hepatology. 52, 945-953 (2010).</li>
</ol>

Dr Rountree Bayer İlaç araştırma desteği alır. Drs. Ding ve Crooks ve Bayan Dang ve Bayan VanKirk rapor etmek hiçbir açıklama yok.

Hematopoietik sistem aksine, hangi hematopoetik kök hücre replacesnormal fizyolojik turn-üzerinde lökositler, kırmızı kan hücreleri ve trombositler, karaciğer kök hücre, veya yetişkin karaciğer progenitör hücrelerin, normal karaciğer katılmayan bir hücresel farklılaşma sistemi korumak için sorumludur homeostasis. 5,6 akut karaciğer hasarı veya kısmi hepatektomi, hepatositler, sonra farklılaşmış karaciğer epitel olarak, kayıp karaciğer kitlesi yerine yayılması birkaç tur geçmesi. 5,6 Sadece kronik zedelenme sırasında gözlenen karaciğer kök hücreler çoğalmaya. 1,5 -11 Bunlar yetişkin, organ spesifik kök hücreler 1,5-8 İlginçtir, karaciğer kanseri büyük çoğunluğu kronik yaralanma arka plan üzerinde gelişir. hepatosit ve cholangiocytes hem içine ayırt etmek için önerilmiştir ve bu nedenle karaciğer kök hücreleri de olduğu öne sürülmüştür karaciğer kanseri bir altkümesi için öncüleri. 2-4,12-17 Okaraciğer hücre çalışmaları kök önemli sorunlardan ne fonksiyonel analizi için hücrelerin nadir populasyon izolasyonu olduğunu. Örneğin, karaciğer hücrelerinin büyük çoğunluğu cholangiocytes ve diğer küçük olmayan parankimal hücreler önemli ölçüde daha büyük olan hepatositler, vardır. Hücrenin bölmelere (- parankimal fraksiyon ve küçük hücreler - büyük hepatositlerin olmayan parankim fraksiyonu) içine bütün karaciğer kırarak, ve daha fazla CD45 negatif hücrelerin (non-hematopoetik hücreler) için seçerek, biz kök hücrelerin başlangıç ​​popülasyonu zenginleştirmek mümkün 600 kat fazla. Unutmayın ki 1,18-21, biz CD133 + nüfusunun% 100 saf kök hücre popülasyonu, ama açıkça farklı soy ve repopulation potansiyeli ile, hücrelerin heterojen nüfus temsil ettiğini belirten hiçbir şekilde vardır. Alanın önemli sınırlamalar biri kök hücre ve progenitör hücrelerin tanımlarını olduğunu. Biz bu çalışmada daha geniş terim &quot;kök hücre&quot; kullanabilirsiniz, ancak sıkı tanımı, CD133 + non-parenchymal hücreler iki soy progenitör nüfusu temsil eder. Karaciğerde mevcut kök ve progenitör araştırma durumu göz önüne alındığında, bu rapor bu alanda ilgilenen araştırmacılar için bir başlangıç ​​noktası sağlamaz. Bu tür yeni belirteçler EpCAM, 22,23 ya da bu gibi SOX9 gibi transkripsiyon faktörleri, 24 gibi, çıktıkça bunlar dahil edilebilir. Örneğin, biz EpCAM + hücreleri ve CD133 + hücreler arasındaki örtüşme oldukça yüksek oranda bulduk. Karaciğer kök hücre çoğalması artışı gösteren normal bir fare karaciğer gibi kronik karaciğer hasarı modellerinden kök hücre izolasyonu için bu yazıda ayrıntılı bir süreç. Canlı hücreleri kullanarak fonksiyonel çalışmalar izolasyonu sonra yapılabilir gibi bu yöntem, dondurulmuş veya formalin tespitli karaciğer standart immunohistokimyasal üzerinde belirgin avantajları vardır. 1,3,4 Bu sürecin belirli bir amaç olabilir karaciğer kök hücrelerin nispeten saf nüfusu izole etmektir klonal vitro yaygınlaştırılmalıdır. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Bu prosedüre birincil sınırlama izole hücrelerin çoğunluğu (Sorun Giderme bölümüne bakınız) akım sitometri sonra geçerli olmayacak olmasıdır. Bu hücrelerini hazırlamak için gereken saat sonucudur ve önceki izolasyon için nüfus arıtmak için gerekli olan çok sayıda prosedürleri. Karaciğer acil FACS analizi için tek bir hücre süspansiyonu sindirilir ise, hepatosit ve diğer non-parankimal hücreler arasındaki boyut farkı etkili FACS kapısı yaratılması imkansız hale getirecek. Karaciğer dışı parankimal hücrelerin hematopoetik hücrelerin ortadan kaldırmadan, kullanılan varsa, CD133 + hücreler önemli sayıda kesir kirletebilir hematopoetik kökenli olabileceği riski vardır. Ayrıca, Miltenyi filtre yoluyla hücreler işleme göre, tek tek hücreler ve hücre kümeleri oldukça küçük toplanır. Bu örnek FACS alımı iğne tıkamaz sağlar. Bu prosedür için Alternatifler m dahilgibi belirteçler, herhangi bir alternatif hücre yüzeyi gibi CD49f, EpCAM olarak işaretleyici, ya da kombinasyon için odification CD133 + EpCAM + ikinci bir yayınlanan raporda olmayan bir parankimal fraksiyondan karaciğer kök hücreleri izole etmek için bir yoğunluk gradiyenti kullanır. Bu prosedür Ultra-santrifüj (8000 xg) gerektirir, prosedürü için önemli bir zaman ekler ve bizim deneyim, büyük ölçüde ön FACS hücresel verimi ve post-FACS canlılığı azalır. 8 Gelecekteki deneyler fetal böyle HNF3, HNF4α gibi karaciğer genlerin ve αfp.In ek olarak, Western blot analizi ile ifade edilen proteinlerin immünsitokimya kültürdeki hücre RT-PCR sonuçları teyit etmek için kullanılabilir içeren gen ekspresyon analizi daha geniş bir aralıkta bulunmaktadır. Unutulmaması gereken bir konu Biz artık rutin stellat hücreleri belirteçleri (Sorun Giderme bölümüne bakınız) yönelik örnekler taranması 25. Karaciğer yıldızsı hücreleri üzerinde CD133 ekspresyonu tespit son eseridir ve kimliği yokBizim kesirler önemli kontaminasyon yazısından. Bu karaciğer sindirim ve hücre izolasyonu farklı teknikleri. 2,3,26 ilgili olabilir Hücrelerin çoğunluğu hemen FACS izolasyon sonrasında uygulanabilir olmayacağı gerçeğine dayanarak, biz hayvanlarda kullanmadan önce, toplu CD133 + hücreleri veya tek hücre şeklinde, ya hücreler kaplı olmasını öneririz. In vitro 5-7 gün anlamlı tümörü analiz sonuçları iyileştirecektir. Koloniler toplu CD133 + izole hücrelerinden açılabilir kez ek olarak, tek bir hücre izolasyonu zorluklarına verilen, bu yalnızca yapılmalıdır. Kültür karaciğer kök ve progenitör hücreler için kullanılan olabilir, çeşitli kültür koşulları ve iskele proteinlerinin bir daha kapsamlı bir tartışma sıra Lola Reid ile karakterize edilmiştir. Bu çalışma temel izolasyon teknikleri öğrenilebiliyor kez araştırmacıların kendi araştırma programı içine dahil olabilir alternatif koşulları ve değişiklikler sağlar. 27,28 Dr Reid kelk da karaciğer kök hücreleri ve kararlı ataları arasında soy biyoloji ve olgunlaşma daha ayrıntılı bir analiz sunmaktadır. In vivo tümör analizi açısından, öncelikle 1x10 6 hücre kullanılarak, in vitro klonal genişletti CD133 + hücreleri taze izole hücreler ve hücreleri kullanılarak başarı oldu. / - - Ve karaciğer özel PTEN - / - Biz kronik karaciğer hasarının ontwo genetik suşları, MAT1a odaklanmıştır fareler ve biz çıplak farelerin ve tümör büyümesi için hosts olarak wild-tip farelerden iki faydalanmış. Onlar pre-malign belirgin karaciğer hasarı modellerinde izole ise bizim deneyimlerimize göre, CD133 + karaciğer kök hücreleri sadece tümörleri oluşturacaktır. Unutmayın CD133 oluşan tümörler + hücrelerin genel tümörleri için bir kök hücre veya progenitör hücre kökenli düşündüren, hepatoselüler karsinom ve kolanjiokarsinom özellikleri de var. 2-4,29 Tümörler sonra takip çalışmaları inclu belgelenmiştirdes standart tümör dokusunun patolojik analizi (H &amp; E boyama) ve immünohistokimyasal boyama. Buna ek olarak, tümörler FACS analizi ya da yeniden kültür için kıyılmış ve sindirilebilir. 2-4,30 Sonuç olarak, biz CD133 + karaciğer kök hücreleri ve CD133 + kanser kök hücrelerinin izolasyonu, genişleme, ve temel karakterizasyonu için bir prosedür detaylandırılmıştır. Çekim Trouble: CD45 kontaminasyon: Önceki FACS analizi ve izolasyon bir CD45-FITC Ab ekleyerek değerlendirilebilir CD45 + hücreleri, kirlenme varsa Adım 3 için, CD45 antikoru microbead süresinin dolmadığından emin olmak için kontrol edin ve süzüntü toplandı sadece ederken filtre manyetik tutucu idi. Filtre manyetik tutucu CD45 + hücreler içerir değilken herhangi bir süzüntü toplanır. Düşük hücre sayısı: Yaralanmamış karaciğer, toplam numbe içinCD133 r + non-parankimal izole 10.000 daha az olabilir. Bu hücreler sakin karaciğerde nadirdir. Bu tür DDC% 0.1 diyet gibi bir kronik yaralanması modeli için, 100.000 hücre sayısı önemli ölçüde artacaktır. Toplam hücre sayısı önemli ölçüde bu sayıların altında ise, dikkate alınması gereken bir konu FACS Ab boyama olduğunu. Yoksul boyama yoksul bir randıman vereceğini gibi, CD133 Ab dolmamış olduğundan emin olmak için kontrol edin. Ayrıca, biz FACS izolasyon açmadan önce göreli nüfusu belirlemek için karaciğer dışı parankimal hücreler FACS analizi gerçekleştirerek öneririz. FACS sonrası Düşük hücre canlılığı: Canlılığının konulardan biri hücreleri nasıl işlendiğini bağlı ve ne zaman içinde. Olabilir İdeal olarak, tüm hücre izolasyon prosedürü, 1-4 adımları, adımlar arasındaki herhangi bir gecikme olmadan yapılmış ve aynı gün içinde tamamlanması gerekir. 1-4 adımları arasında herhangi önemli bir gecikme büyük ölçüde hücre canlılığı azaltacaktır. C ile ilgili ikinci bir konuell canlılığı FACS izolasyonu için kullanılan kılıf basıncı ile ilişkili olabilir. Biz daha düşük bir kılıf basınç kullanmanızı öneririz. Hücreler izole edilir kez sıralama sonrasında buz üzerinde önemli bir depolama alanı da canlılığı azaltacaktır gibi Son olarak, onlar, hemen kaplı olmalıdır. CD133 + non-parankimal heterojenite: Son raporlar hepatik stellat hücreler de CD133 ekspresyonu ve bazı plastisite var olabileceğine işaret etmektedir. Dolayısıyla 25, Albumin ve Krt19, ek doğrulama ile iki potens genleri doğrulayan ek olarak bu tür glial fibriler asidik protein olarak stellat hücreler ile ilişkili genlerin, içerebilir hareketsiz stellat hücreleri ve aktive edilmiş hücreler stellat ve alfa-aktin ve desmin. 3,4,26 Buna ek olarak, CD133 + nüfusun daha geniş bir projenitör nüfus temsil eder. Böyle EpCAM gibi ikinci bir işaretçi, ve aynca nüfus düzeltilmesine yardımcı ve sınır heterojenite olabilir.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> DMEM: F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 10565-018 </td><td> Fenol kırmızısı ile </td></tr><tr><td> CD45 mikroboncukları </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-301 </td><td></td></tr><tr><td> Hepatosit Büyüme Faktörü </td><td> Sigma </td><td> H1404 </td><td></td></tr><tr><td> Epidermal Büyüme Faktörü </td><td> Sigma </td><td> E4127 </td><td></td></tr><tr><td> DNaz </td><td> Sigma </td><td> DN25 </td><td> 1 gram </td></tr><tr><td> Kollajenaz D </td><td> Roche </td><td> 1088874 </td><td></td></tr><tr><td> Pronazın </td><td> Roche </td><td> 0165921 </td><td></td></tr><tr><td> 70 mikron mesh süzgeç </td><td> Balıkçı </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> Omniscript RT </td><td> Quaigen </td><td> 205111 </td><td> 50 reaksiyon </td></tr><tr><td> HotStarTaq </td><td> Quaigen </td><td> 203203 </td><td></td></tr><tr><td> Miltenyi LD sütunu </td><td> Miltenyi </td><td> 130-042-901 </td><td></td></tr><tr><td> CD133-PE FACS Ab </td><td> eBioscience </td><td> 12-1331-82 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin kaplı plakalar </td><td> BD </td><td> 354410 </td><td> De 96 </td></tr><tr><td> Tripsin% 0.05 EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25300-354 </td><td> 100 mL </td></tr><tr><td> RNeasy Mikro Kiti </td><td> Quaigen </td><td> 74004 </td><td> 5x10 5 hücre veya daha az için 50 sütun </td></tr><tr><td> Lyse Ecz </td><td> BD </td><td> 555899 </td><td> 10X konsantrasyonda </td></tr></tbody></table>

klonal genişleme cd133 + karaciğer kök hücre İzolasyonu

Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

Karaciğer kök hücre ya da oval hücreler, kronik karaciğer hasarı sırasında çoğalırlar ve hepatosit ve cholangiocytes hem içine ayırt önerilmiştir. Buna ek olarak, karaciğer kök hücreleri karaciğer kanseri, Hepatosellüler karsinoma bir altkümesi için öncüleri olarak öne sürülmüştür. Karaciğer gibi herhangi bir solid organ hücre çalışmaları kök başlıca güçlüklerden biri, ayrıntılı analizi için hücre nadir nüfus izolasyon. Örneğin, karaciğer hücrelerinin büyük çoğunluğu non-parankimal hücreler önemli ölçüde daha büyük olan hepatositler (parankimal fraksiyon), vardır. Karaciğer spesifik hücresel bölmeleri (yani parankimal ve non-parankimal kesirler) zenginleştirmek, ve CD45 negatif hücreler için seçerek, biz izin bu raporda proceduresdetailed 600-fold.The üzerinde kök hücrelerin başlangıç ​​popülasyonu zenginleştirmek mümkün bir katı organ hücrelerin nispeten nadir bir nüfus verimli bir şekilde sıralanması. Bu işlem, isolateli etmek için kullanılabilirartmış karaciğer kök hücre proliferasyonu göstermek, normal fare karaciğer ver kök hücrelerin yanı sıra kronik karaciğer hasarı modelleri. Canlı hücreleri kullanarak fonksiyonel çalışmalar ilk co-lokalizasyon deneyler sonrasında yapılabilir gibi bu yöntem, dondurulmuş veya formalin tespitli karaciğer standart immunohistokimyasal üzerinde açık avantajları vardır. FACS izolasyon detayları özel enstrümantasyon ve temel akım sitometri prosedürlerin güçlü bir çalışma bilgi bağımlı olarak bu raporda özetlenen yordamı gerçekleştirmek için, bir araştırmaya dayalı bir akım sitometri çekirdeği ile bir çalışma ilişkisi kuvvetle teşvik edilir. Bu sürecin belirli bir hedefe klonal in vitro açılabilir karaciğer kök hücrelerinin bir nüfus izole etmektir.

İşte biz bütün fare karaciğer doku sindirim, hücre zenginleştirme ve flow sitometri izolasyonu gerektiren bir süreçten CD133 eksprese karaciğer kök hücre ve kanser kök hücrelerin izolasyonu tarif. Biz gelişmiş tek hücre izolasyonu ve klonal genişleme için yöntemler içerir.

Klonal Genişleme CD133 + Karaciğer Kök Hücre İzolasyonu

Karaciğer kök hücreleri veya oval hücreler, kronik karaciğer hasarı sırasında çoğalırlar ve hem hepatositlere hem de kolanjiyositlere farklılaştıkları öne sürülmektedir. ...

Bu video, kronik karaciğer hasarını takiben CD 133 hücre yüzeyi ekspresyonunu kullanarak klonal genişlemeyi incelemek amacıyla karaciğer kök hücrelerini izole etme prosedürünü göstermektedir. İlk olarak, kronik karaciğer hasarı olan bir fareden karaciğer çıkarılır ve tek hücre süspansiyonu elde etmek için sindirilir. Ardından, eritrositleri uzaklaştırmak için eritrosit liz tamponu eklenir ve çözelti, CD 45 lökositlerini uzaklaştırmak amacıyla CD 45 antikoru içeren manyetik bir kolona uygulanır.CD 45 eksiltilmiş hücreler, daha sonra CD 1 33 pozitif karaciğer kök hücrelerini zenginleştirmek için sort edilir. Son olarak izole edilen CD 1 33 pozitif karaciğer kök hücreleri kültüre edilir ve genişletilir. İn vitro gen ve protein ekspresyon analizleri, izole edilen CD 1 33 pozitif kök hücrelerin hem hepatositlere hem de osteositlere farklılaşabildiğini göstermektedir.Bu tekniğin, immünohistokimya tekniklerini kullanarak belirteçlerin kolokalizasyonu gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, klonal genişleme ve fonksiyonel analiz için tek hücrelerin izole edilebilmesidir. Kök hücre ve progenitör hücre fenotiplerini doğrulamak amacıyla teknik, ben ve laboratuvarımdaki lisansüstü öğrencisi He Dang tarafından gösterilecektir. Tüm tamponları ve medyaları 24 saat önceden hazırlayın ve kullanıma kadar tüm çözeltileri 4 °C'de saklayın.Besiyerleri, aletler, filtreler ve tüpler steril olmalı ve steril teknikle kullanılmalıdır. Kontaminasyon riskini azaltmak için, ötanazisi yapılmış bir farenin abdominal bölgesini %70 ethanol ile silin. Steril aletler kullanarak abdominal boşluğu açın ve karaciğeri blok halinde ortaya çıkarın.Safra kesesini eksize edilen karaciğerden çıkarın, ardından karaciğerin tamamını kapalı steril bir kap içerisinde laminar akışlı kabine aktarın ve steril bir jilet kullanarak karaciğeri çok sayıda yatay ve dikey kesik kombinasyonuyla ince parçalara ayırın. Bir dakika boyunca, parçalanmış karaciğeri dört kısma bölün ve her bir kısmı 10 mL enzim sindirim çözeltisi içeren ayrı bir 15 mL'lik tüpe yerleştirin. Ardından tüpleri, saniyede bir ila iki çevrim şeklinde ayarlanmış bir çalkalayıcıda, 37 °C su banyosunda 45 dakika boyunca bekletin.İnkübasyonun ardından tüpleri %70 etanol ile silin. Ardından, laminer akışlı bir kabin altında, sindirilmiş karaciğer püresini 70 mikronluk gözenekli filtreden pipetle geçirin ve daha büyük hepatositleri içeren parenkimal fraksiyonu uzaklaştırmak için süzüntüyü steril bir kaba toplayın. Filtreyi, steril takviyeli D-M-E-M-F 12 ortamının iki mililitrelik porsiyonlarıyla durulayın.Sindirilen pulpayı filtreden geçirmek için bir şırınga pistonunun kauçuk ucunu kullanarak ezin. Toplam hacmi yaklaşık 20 mililitreye çıkarmak için bu işlemi beş kez tekrarlayın. Filtratı iki eşit 15 mililitrelik tüpe bölün, ardından dört santigrat derecede bir dakika boyunca 50 G kuvvetinde santrifüjleyin.Santrifüj işleminin ardından, süpernatantı "süpernatant 1" olarak etiketlenmiş bir tüpe aktarın ve parenkimal peleti atın. Ardından, kök ve progenitor hücreleri içeren non-parenkimal fraksiyonu toplamak için, süpernatant 1'i 50 ×g hızında bir dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatant şeklinde etiketlenmiş bir tüpe süpernatantı aktarın. İki numara ve pelleti tekrar atın. Ardından, iki numaralı süpernatantı 50 ×g hızında bir dakika boyunca santrifüjleyin.Santrifüj işleminin ardından, süpernatantı "süpernatant numara üç" şeklinde etiketlenmiş bir tüpe aktarın ve pelletini atın. Son olarak, non-parenkimal fraksiyonu elde etmek için son SNAT numara üç'ü 8 minutes boyunca 180 ×g hızında santrifüjleyin; santrifüj sonrası süpernatantı atın ve hemen kırmızı hücrelerin ve pelletin yıkandığı protokolün bir sonraki adımına geçin. Prosedürün bu bölümünde kullanılan kırmızı hücre lizis tamponu ve miltenei tamponu, beraberindeki yazılı belgedeki talimatlara uygun olarak bir gece önceden hazırlanmış ve 4 °C'de saklanmış olmalıdır.Hücreler ve solüsyonlar buz üzerinde olacak şekilde laminer akışlı kabinde çalışın. Bir önceki adımdaki non-parenkimal peleti 1 mL 1x seyreltilmiş kırmızı kan hücresi lizis tamponunda süspande edin ve 5 mL'lik bir tüpe aktarın. Tüpün kapağını kapatın ve beş saniye boyunca hafifçe vorteksleyin.4 °C'de 15 dakika boyunca inkübe edin. 15 dakika geçtikten sonra ışıktan koruyun. Tüpü 200 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin; döndürme işleminin ardından, lizis olmuş kırmızı kan hücrelerini içeren süpernatanı uzaklaştırın ve yeniden süspanse edin.Peleti bir mililitre buz gibi soğuk ve steril e tamponu içerisinde süspande edin. Beş dakika boyunca 200 ×g hızında santrifüjleyin. Santrifüj işleminden sonra süpernatantı atın ve peleti bir mililitre buz gibi soğuk ve steril çözeltide yeniden süspande edin.Milton tamponuna ekleyin. Ardından, bu hücre süspansiyonundan 10 µL alın ve 10 µL stripe am blue ekleyin. Non parenkimal fraksiyondan CD 45 hematopoetik hücre depleksyonunu gerçekleştirmek için bir hemositometre kullanarak non parenkimal hücreleri sayın.Laminar akışlı kabinde, 100 µL melty tamponundaki toplam hücre konsantrasyonunu 10⁷ ile 10⁸ arasına ayarlayarak başlayın. Tüm prosedür boyunca hücreleri ve tamponları soğuk tuttuğunuzdan emin olun.Ardından, 10 milyon hücre başına 20 µL anti-CD45 mikroboncuk antikoru uygulayın ve 4 °C'de 15 dakika boyunca inkübe edin. İnkübasyonun ardından, 2 mL ek tampon çözelti ekleyin ve 200 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Santrifüj işleminden sonra süpernatantı uzaklaştırın ve 10⁸ hücreye kadar olan miktarı 1 mL içerisinde yeniden süspanse edin.Laminer akışlı kabinde herhangi bir Milt tamponu kullanın, herhangi bir Milt LD manyetik kolonunu manyetik bir tutucuya yerleştirin. Filtratı toplamak için filtrenin altına steril bir beş mililitrelik tüp yerleştirin. Ardından iki mililitre yükleyin.Filtre ön yıkamasını gerçekleştirmek için herhangi bir tamponu eritin. Yıkama tamamlandığında, hücreleri kolona yükleyin. Hücre süspansiyonu kolonun içine girdikten sonra, kolonu yıkamak için bir mililitre erimiş e tamponu ekleyin; bu yıkama işlemini iki kez daha tekrarlayın.Filtrasyon hızını artırmak için kolonla birlikte verilen pistonu kullanmayın. Tüm yıkama işlemleri tamamlandıktan sonra, toplanan CD 45 eksiltilmiş non-parenkimal hücre filtratını 200 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. CD 45 pozitif hücrelerin tutulduğu kolonu atın.Ardından, CD 1 33 pozitif hücreleri izole etmek için akış sitometrisi yapılır; hücreler Milt buffer içerisinde yeniden süspande edilir, 10⁷ hücre/100 µL olacak şekilde 100 µL'lik alikotlar üç tüpe dağıtılır. İlk tüpe 2 µL CD 1 33 PE konjuge antikor eklenir. İkinci tüpe kontrol olarak IgG PE konjuge antikor eklenir.Hücrelerin bulunduğu üçüncü tüp, karanlıkta 15 dakika boyunca dört derece Celsius'ta inkübe edilerek boyanmamış kontrol olarak kullanılacaktır; inkübasyon sonrası iki mililitre boyama tamponunda yeniden süspande edilip beş dakika boyunca 200 xg hızında santrifüjlenir. Süpernatan atılır ve pelet bir mililitre Milton e tamponunda yeniden süspande edilir. Daha sonra, CD 1 33 pozitif hücre popülasyonunun optimize edilmiş kapılaması (gating) için sıralama parametrelerini ayarlamak amacıyla akış sitometresinde boyanmamış hücreler ve IGPE boyalı hücreler kullanılır.FICO ERYN veya RPE kitimiz genel olarak 488 nanometre dalga boyunda lazer yayan tüm akış sitometreleri ile kullanılabilir. Son olarak, CD 1 33 pozitif kapılaması (gait) kullanarak CD 1 33 pozitif hücre popülasyonunu izole edin ve hücreleri steril filtrelenmiş oval hücre ortamında toplayın. Hücreler artık kültüre alınabilir ve CD 1 33 potansiyel durumunu değerlendirmek amacıyla gerçek zamanlı PCR'ın ardından klonal izolasyon gerçekleştirilebilir.Pozitif karaciğer kök hücreleri, burada görüldüğü üzere bu videoda açıklandığı şekilde yaban tipi ve MAT1A nakavt farelerden izole edilmiştir. CD133 pozitif hücreler, yaban tipi farelerin hasarsız karaciğerinden ve kronik karaciğer hasarı modeli olan genetik nakavt MAT1A -/- farelerinden türetilen, yüksek derecede zenginleştirilmiş CD45 tükenmiş non-parenkimal kontrol fraksiyonunun %0,4'ünü oluşturmaktadır. Aynı yüksek derecede zenginleştirilmiş fraksiyonda CD133 pozitif popülasyon on kat veya daha fazla genişlemektedir.Sıralama işleminin ardından hücreler kültüre alınmış ve klonlar genişletilmiştir. Burada, laminin kaplı 96 kuyucuklu plaklarda genişletilen, tekil CD 1 33 pozitif hücrelerden türetilmiş dört koloninin faz kontrast görüntüleri gösterilmektedir. Bu hücreler izolasyondan sonraki yedinci gündedir ve kolonilerin yaklaşık 25 hücre olduğu yedinci günde küçük, kompakt epitel hücre kolonileri sergilemektedirler.Hücrelerden RNA izole edilmiş ve bu R-T-P-C-R deneylerinde görülebileceği üzere kolanjiyosit belirteci CK 19'un gen ekspresyonu analiz edilmiştir. Gen ekspresyonu, hepatosit belirteci albumin ve kolanjiyosit belirteci CK 19'un ekspresyonunu göstermekte olup, CD 1 33 pozitif başlangıç tek hücre izolasyonu ve in vitro ekspansiyonundan birkaç hafta sonra CD 1 33 pozitif hücrelerin potansiyel durumunu doğrulamaktadır. Mat 1, A minus minus modelinden elde edilen 1 × 10⁶ hücre, immün yetmezli nude farelere subkutan olarak enjekte edilir. Oklar, hücrelerin enjekte edilmesinden dört hafta sonra büyüyen tümörleri göstermektedir.CCL4 veya %0,1 DDC diyeti gibi toksinle indüklenen kronik karaciğer hasarı kaynaklı CD133 pozitif hücreler tümör oluşturmazlar. İn vivo tümör oluşumu, kök hücre popülasyonu içindeki malign potansiyeli veya kanser kök hücresi fenotipini belirlemek için kullanılır. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, uygun şekilde uygulandığı takdirde sekiz saat içinde tamamlanabilir.Bu prosedürün ardından, EPAM veya diğer faktörler gibi ek faktör markerları eklenebilir. Karaciğer progenitor hücre popülasyonlarının yüzey markerlarını belirlemek gibi ek soruları yanıtlamak için yan popülasyon flx gibi teknikler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, akış sitometrisi kullanarak karaciğer kök ve progenitor hücrelerinin nasıl izole edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Hayvan dokusuyla çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu prosedürü gerçekleştirirken eldiven takmak ve uygun laboratuvar tekniklerini uygulamak gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

isolation-of-cd133-liver-stem-cells-for-clonal-expansion

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Balona hücre bağlılık hızına göre kas-iskelet yumuşak dokulardan Yalıtımlı yetişkin kök hücreleri.

Yumuşak Kas-iskelet Dokular Kök Hücre Yalıtımlı

Kanser kök hücreleri (CSCS) malignitelerin çok sayıda tespit edilmiştir. Bu protokolde, aldehit dehidrogenaz aktivitesi ve CD44 ve CD24 ifade kullanan bir insan pankreas adenokarsinomu xenografts CSCS yalıtmak için akım sitometri yöntemi açıklar. Bu canlı hücreler, sonra fonksiyonel ve analitik çalışmalar kullanılabilir.

İnsan Pankreas Kanseri Xenografts Kök Hücre İzolasyonu

Bu videoda, manyetik olarak aktive edilmiş hücre sıralaması kullanılarak bir primer melanom hücre hattından CD133 negatif ve pozitif melanom kök hücrelerinin izole edilmesi tekniği açıklanmaktadır. CD133 pozitif melanom CSC'leri, melanom tümörigenezisinin mekanizmalarını anlamak için daha fazla incelenmiştir.

Melanom Kök Hücre İzolasyonu: Manyetik Aktivasyonlu Hücre Sıralaması Kullanılarak CD133 Pozitif ve Negatif Melanom Hücreleri Elde Etmek İçin Bir Yöntem

Bu video, seçici genişleme için insan karaciğer dokusundan doğal öldürücü hücreler veya NK hücreleri de dahil olmak üzere lenfositlerin izolasyonunu göstermektedir. Enzimatik ve mekanik sindirim, ardından yoğunluk gradyan ayrımı, NK hücreleri de dahil olmak üzere lenfosit izolasyonunu destekler. Toplanan lenfositler, NK hücrelerinin seçici genişlemesi için daha fazla kullanılabilir.

Seçici Genişleme için Karaciğer Dokusundan Doğal Öldürücü Hücre İzolasyonu

Bu videoda, insan bağışıklık sistemi (HIS) fareleri oluşturmak için bir teknik gösterilmektedir. CD34+ hematopoetik kök hücreler (HSC'ler), antikor kaplı manyetik boncuklar kullanılarak insan kordon kanı buffy coat hücrelerinden izole edilir. CD34+ HSC'ler, sitokinlerle zenginleştirilmiş ve kriyoprezervasyonlu bir büyüme ortamında genişletilir. Son olarak, çözülmüş HSC'ler, HIS fare modelini oluşturmak için immün yetmezliği olan bir fare yavrusuna enjekte edilir.

İnsan Bağışıklık Sistemi Fareleri Oluşturmak için Kordon Kanı Hematopoetik Kök Hücrelerinin İzole Edilmesi

Bu makale, birincil hücre kültürleri ve nasıl tümör hücrelerinden eritrositler ve fibroblastların kirlilikler çıkarmak için taze olarak elde edilen melanom doku hazırlanmasını tarif etmektedir. Son olarak, biz nasıl tarif...

Hasta Türetilen Hücre Kültürü ve CD133 İzolasyonu<sup&gt; +</supMelanom dan&gt; sağlayan olası Kanser Kök Hücreleri

Burada açıklanan, insan maternal-fetal arayüzü olan decidua basalis ve decidua parietalis'in sızan lökositlerini izole etmek ve daha fazla incelemek için bir protokoldür. Bu protokol, hücre yüzeyi belirteçlerinin bütünlüğünü korur ve akış sitometrisi analizi ile kanıtlandığı gibi aşağı akış uygulamaları için yeterli canlı hücre verir.

İnsan Maternal-Fetal Arabirimi lökosit İzolasyonu

İnsan hepatositlerini ve parankimal olmayan karaciğer hücrelerini aynı donörden izole etmek için bir teknik tanımlanmıştır. Farklı karaciğer hücresi tipleri, fonksiyonel karaciğer modelleri ve doku mühendisliği için temel oluşturur. Bu yeni yöntem, karaciğer hücrelerini yüksek verim ve canlılıkta izole etmeyi amaçlamaktadır.

İlköğretim İnsan Hepatositlerin İzolasyonu ve Non-parankimal karaciğer hücrelerinin Binbaşı popülasyonları İlgili Protokolü

Genetik olarak tasarlanmış fare modellerinden primer tümöre özgü endotel hücrelerini izole etmek ve kültürlemek için güvenilir bir yöntem bildiriyoruz.

Tümör spesifik Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü Genişleme

Karaciğer yaralanmaları heterojen bir hücre popülasyonunu temsil progenitör hücre genişlemesi eşlik ediyor. Bu hücresel bölmenin yeni sınıflandırma birden altgruplarının ayırmada sağlar. Burada tarif edilen yöntem, analiz ve başka analizler için de kullanılabilen çeşitli alt-kümelerinin yüksek saflıkta izole sitometri akışı göstermektedir.

İzolasyon ve Roman Yüzey Etiket Kombinasyon ile tanımlanır Karaciğer progenitör Alt Grupları zenginleştirilmesi

Bu iletişim kuralı CD133 değiştirmek için güvenli ve verimli bir yordam gösterilmektedir+ hematopoietik kök hücre. Sunulan viral sigara, manyetik polyplex dayalı yaklaşım temel terapötik kök hücre etkileri de manyetik rezonans görüntüleme üzerinden yönetilen hücre ürün izleme gelince optimizasyonu için sağlayabilir.

Yetişkin kemik iliği türevi hematopoetik kök hücre mühendislik manyetik hedefleme ile kombine etkinleştirmek için hücre içine mikroRNA Transfer için iletişim kuralı

Öğrenin, kronik karaciğer hasarı sonrası fare karaciğerinden CD133 pozitif karaciğer kök hücrelerinin izolasyonu ve klonal genişlemesi için akış sitometrisi kullanarak tek hücre analizi yapmayı.

Klonal Genişleme CD133 + Karaciğer Kök Hücre İzolasyonu

Daha fazla video keşfet