Name: Uzaktan Yüksek throughput fenotipleme için Fare Göz Enükleasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Öğrenin, yüksek verimli fenotipleme taramaları için fare gözü enükleasyon tekniğini. Bu yöntem, doku fiksasyonu ve anatomik referans noktalarının doğru kullanımıyla araştırmacılara rehberlik eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bartly J. Mondino MD, Jules Stein Göz Enstitüsü, UCLA Direktörü ve Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui Beyaz ve Sanger Enstitüsü, Wellcome Trust Genom Kampüsü&#39;nde Jeanne Estabel Körlük Engellenir Araştırma. Bu araştırma Oftalmik ve Görsel Araştırma Hayvanları Kullanım ARVO Bildirimi ile uyumludur.

1. Künt diseksiyon: sabitlenmemiş örneklerinde fare göz Enükleasyon <ol><li> Maruz kalma ve posterior dünya (gözün) yüzey erişimi geliştirmek için göz kapaklarını açarak çekin. </li><li> Yörüngede (altında) dünya (göz çukuru) arkasında eğik pansuman forcep yerleştirin. Mahajan Sharptip pansuman forcep (malzeme ve reaktiflerin tabloya bakınız) bu adımı kolaylaştırmak için sivri uçlu özel bir araçtır. </li><li> Forcep kapatın ve dünya sıkma önlemek için dikkatli olmak ise dünyanın arkasında bağ dokusunda ve optik sinir kavramak. </li><li> Yavaşça yukarı forcep çekin ve yörüngeden küresi koparmak. Beyaz iplik benzeri doku optik sinir olduğunu. </li><li> PBS içinde göz yerleştirin. 30-gauge iğne kullanarak, tek bir delinme küresi içine iğne 1-2 mm takarak limbus hemen posteriorunda yara olun. Bu göz dokusuna nüfuz çekemeyen gibi glutaraldehit gibi fiksatif,, en doğrudan sağlarter göz. Bir sabitleştirici, örneğin paraformaldehit veya alkol gibi, ilgi göz dokusu içine difüzyon yeteneğine sahipse bu delme yara bölgesinin oluşturulması gerekli olmayabilir. </li><li> Hemen daldırma fiksasyonu için fiksatif içine tüm göz yerleştirin. </li></ol> 2. Keskin Diseksiyon: fare gözü aşağıdaki perfüzyon fiksasyon Enükleasyon <ol><li> Uzakta dünyanın gelen göz kapağı tutmak için kavisli bir colibri forcep kullanın. </li><li> Dünya paralel Orient kavisli Westcott diseksiyon makas, yörüngenin arkasına doğru hedeflerken. </li><li> Inferior, medial, üstün, ve lateral taraftan dünya çevreleyen sabit bağ dokusu kesin. </li><li> Dünyanın arkasındaki kavisli forcep yerleştirin, dünya üzerinde basmadan bağ dokusu tutun ve gözün enükleasyonu için ileriye doğru çekin. Orbital bağ doku perfüzyonunun tespit edildiği sert olduğu için, orbital doku ilave kesme topak tamamen serbest bırakmak için gerekli olabileceke. </li></ol> 3. Fiksasyon ve Paketleme Sabit dokuların Nakliye uygun etiket ve ambalaj dahil olmak üzere kurumsal ve posta hizmet gereksinimleri takip etmelidir. Aşağıdaki protokol, ortam sıcaklığında bir enfeksiyöz olmayan biyolojik numune nakliye bir örnektir. Bu 3 ambalaj katmanları ama hiçbir A / B sınıfı biyolojik madde veya sıvı azot etiketleri gerektirir. <ol><li> Tespit kısa olması durumunda, en az 3 mL sabitleştirici, ya da post-sabitleştirici tampon ile 5 mililitrelik bir cam sintilasyon şişesi içine göz yerleştirin. Şişenin kapağı üzerinde takip numarasını yazın ve Parafilm ile kapayın. </li><li> Biyolojik numune içine yerleştirin sintilasyon şişeleri koliyi onayladı. Örnek içine yerleştirildiği bir kapalı kap, bir emici orta tabaka ve bir dış koruyucu katman: Bu enstitü, örneğin, uygun kaplar üç tabaka gerektirir. </li><li> Bir kabarcık şal paket içine ve sonra app içine bir kap yerleştirinuygun dokümantasyon ile birlikte roved laboratuar konteyner nakliye. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Gözlerin Histolojik incelemede Hematoksilen-Eozin boyama, enzimatik ifade algılama, transmisyon elektron mikroskobu ve immünhistokimya gibi çeşitli yöntemler ile gerçekleştirilebilir. % 4 paraformaldehid immersiyon fiksasyon sonrasında doku parafin ve mikrotom üzerinde kesit içinde gömülü idi. Yüksek verimli fenotipleme, biz öğrenci-optik sinir bölümleri analiz, göz örnek tüm doku tipleri (Şekil 1). Doku bölümleri de lacZ ifade (Şekil 2), hücresel organel transmisyon elektron mikroskobu (Şekil 3) ve antikorlar (Şekil 4) ile spesifik moleküllerin ekspresyonu incelendi. Bizim fenotipi tarama yöntemi olarak, (Latera nazal göre (medial canthus) ve zamansal ile gözün yönünü korumak için önemli değildil canthus) taraf. Göz yönelimi gerekli ise en az iki seçenek vardır. Enükleasyon sonra, bir el koter cihazı ile üç pozisyonunda temporal korneaya ışık koter uygulamış. Lezyon histoloji açıktır ve histolojik mürekkepler gibi işleme sırasında kaybolmak yok. Downside koter zararlardan muayene için kritik bir doku olabilir kornea olduğunu. Diğer seçenek ekstraoküler kas eklemeleri belirleyebilir yetenekli bir anatomist gerektirir. Stereomikroskopta altında, inferior ve superior oblik kas ekleme belirlenmesi dünyanın inferior ve superior ve yönü işaretler. 3. Her iki yönelim yöntemi ile, bir gözün sağ veya sol olarak numune izlemek için önemlidir. Birlikte, bu kesit öncesinde tam küre yönelim sağlayacaktır. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig1.jpg" alt="Göz anatomisi mikrografı; histoloji bölümleri; lens, retina, kornea; hücresel katman detayları." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Fare göz histolojik görüntüler afte r uzaktan edinimi. Fare gözler% 4 paraformaldehit ile perfüzyon fiksasyon izleyerek keskin diseksiyon ile iki parçaya ayrıldı. Hematoksilen ve eosin ile boyandı A. Öğrenci-optik sinir bölümünde tüm doku altyapılar korunması gösterir. Optik sinir, ON. ; IPL, iç pleksiform tabaka; INL, iç nükleer tabakada; OPL, dış pleksiform tabaka; onl, dış RGC, retina ganglion hücrelerinin: Normal retina (yeşil ölçek çubuğu = 500 mikron) B. Daha yüksek bir büyütme ile laminar yapısını gösterir nükleer tabaka (fotoreseptör hücre) (ok); OS, fotoreseptör dış segmentleri;; RPE, retina pigment epiteli, C, koroid, fotoreseptör iç segment (ok başı) IS. (Yeşil ölçek bar = 50 mikron) C. Normal retina ile karşılaştırıldığında, bu numune fotoreseptör dejenerasyonu için tiner kaynaklanmaktadır. Onl, IS ve OS (ok) tamamen bulunmaz. (Yeşil ölçek bar = 50 mikron) "Alt =" Şekil 2 "/&gt; Transgenik farelerde Şekil 2. LacZ ekspresyonu. Gözler (5 mM K3Fe (CN) 6, 5 mM K4Fe (CN) 6, 2 mM MgCl2,% 0.02 NP40 diseksiyon ile çıkarıldı ve 1 mg / ml X-gal çözelti içerisinde bekletilmiştir , 37 geceleme ve% 0,1 sodyum deoksikolatın) ° C Gözler 30 dakika ve bir mikrotom üzerinde kesit için% 2 formaldehyde/0.2% gluteraldehit ile tespit edildi. X-gal ürün (mavi) etiketler: A. Silier epiteli, B. kornea epitel ve C retina retina ganglion hücre (RGC) katmanı. INL, iç nükleer tabakada; onl, dış nükleer tabaka. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig3.jpg" alt="Retina yapısı; çubuk dış segmentlerini, RPE hücrelerini, Bruch zarını gösteren elektron mikrografı." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3,. Retina pigment epiteli (RPE) Transmisyon elektron mikroskobu. Bir delinme yara künt diseksiyon ve yaratıldıktan sonra, gözleri daldırma vardı 0.1M sodyum fosfat tamponlu% 2.5 lik Paraformaldehyde /% 2.5 glutaraldehit ile tespit edildi. Gözler secon edildidarily,% 1 osmiyum textroxide sabit giderek susuz ve Spurr en reçine gömülü. Doku 90 nm'de kesitli ve Formvar kaplı bakır yuvası ızgaralar üzerine yerleştirilir ve bir transmisyon elektron mikroskobu ile görüntülendi. Mikrografı, fotoreseptör dış nörosensöriyel retinanın kesimleri, retina pigment epiteli içindeki melanozom (M) ve Bruch membranı gösterir. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig4.jpg" alt="Bakteriyel biyofilm yapısının floresan mikroskopi görüntüsü; 20 mikron ölçeğinde büyütme." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 4,"> Şekil 4. Fare vitreusta süperoksit dismutaz-3 immünhistokimyasal etiketleme (yeşil). Gözler künt diseksiyon ile çıkarıldı ve% 4 paraformaldehid daldırma fiksasyon uygulandı. Onlar mikrotom kullanılarak parafin ve kesitli gömüldü. 01:50 seyreltilmiş Doku kesitleri tavşan poliklonal SOD3 antiserum ile inkübe edildi. SOD3 ifade keçi anti-tavşan IgG (H + L)-Alexa Fluor 488 konjuge sekonder antikor ile tespit edildi. SOD3 Etiketlenmesi gre gösterilirtr.

<ol><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li>
<li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Laboratories%2C+Mouse+Genetics+Meeting%22%5BJournal%5D)">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li>
<li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. In Research Methods For Mutant Mice. , CRC Press. Boca Raton, FL. (2002).</li>
<li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li>
<li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li>
<li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+fundus+photography+and+angiography%3A+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li>
<li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+resources+for+vision+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li>
<li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus%5BTitle%5D)+AND+%22Vision.+Res%22%5BJournal%5D)">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li>
<li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy%2C+electroretinograms%2C+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Doc.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li>
<li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li>
<li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+%28PDE6B%29+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mutat%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Çoğu transgenik fareler gözleri incelemek yok laboratuvarlarda bulunması. Bizim video tekniği gözleri ile az deneyime sahip laboratuvarlar doku edinimi optimize etmek için uzaktan cerrahi beceri transferi için basit ve standartlaştırılmış bir yöntem gösterilmektedir. Bu video tekniği anlamlı karşılaştırmalı fenotipik ve moleküler çalışmalar önlemek standart olmayan doku toplama ve fiksasyon yöntemleri nedeniyle uzman sitelere sınırlı sayıda kullanımı yüksek hacimli fenotiplendirme, büyük bir hatadır üstesinden yardımcı ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Isim </th><th> Şirket </th><th> Katalog Numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Kavisli Giyinme Forcep </td><td> Storz Ophtalmics&#39;in </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip soyunma forcep </td><td> Storz Ophtalmics&#39;in </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> Kavisli Westcott Makas </td><td> Storz Ophtalmics&#39;in </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver Mikrocerrahi Blade </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 İnce Castroviejo dikişin Forseps </td><td> Storz Ophtalmics&#39;in </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0.12 Colibri forseps </td><td> Storz Ophtalmics&#39;in </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> 30-gauge iğne </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Balıkçı </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Balıkçı </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Cam sintilasyon şişeleri </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> % 16 paraformaldehit </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 15700 </td><td></td></tr><tr><td> 0.1M sodyum fosfat tamponlu% 2.5 lik Paraformaldehyde /% 2.5 glutaraldehit </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 15700 &amp; 16300 </td><td> Laboratuvarda Karışık </td></tr><tr><td> 50% Glutaraldehit </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 16300 </td><td></td></tr><tr><td> 0.25% Formvar </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 15810 </td><td></td></tr><tr><td> PolisSlot Izgara başına </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> % 4 osmiyum tetroksit </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 19140 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-SOD3 antikor </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> Keçi anti-tavşan Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Spurr sitesi gömme reçine </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 14300 </td><td></td></tr></tbody></table>

uzaktan yüksek throughput fenotipleme için fare göz enükleasyon

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

Fare insan gözü oftalmik hastalık translasyonel çalışma için önemli bir genetik modelidir. Bu tür makula dejenerasyonu, fotoreseptör dejenerasyonu, katarakt, glokom, retinoblastom ve diyabetik retinopati gibi, insanlarda körleştiriyor hastalıklar 1-5 En transgenik ve nakavt fareler olmayan oftalmik hastalıklar çalışma laboratuarları tarafından üretilen oylandı. Transgenik farelerin değinmeyecek ama oylandı organ sistemleri arasındaki genetik koruma, aynı genlerin çoğunun da oküler geliştirme ve hastalık bir rol oynadığını düşündürmektedir. Dolayısıyla, bu farelerin gözünde yeni genotip-fenotip ilişkisi keşfetmek için önemli bir kaynak oluşturmaktadır. Bu farelerin dünyaya yayılmış olduğundan, bu satın korumak ve verimli, maliyet-etkin şekilde fenotip bunları zordur. Böylece, en yüksek verim oftalmik fenotipleme ekranlarında canlı farelerde gözler incelemek, oftalmik uzmanlığı bünyesinde gerektiren birkaç yerle sınırlıdır. 6-9 laboratuar tarafından geliştirilen diğer bir yaklaşım, transgenik fare gözünde büyük ya da küçük-çaplı araştırmalar kullanılabilir uzak doku-kazanılması için bir yöntemdir. Video tabanlı cerrahi beceri transferi, doku fiksasyonu ve nakliye için Standartlaştırılmış prosedürler herhangi bir laboratuar mutant hayvanlar kadar tüm gözler toplamak ve moleküler ve morfolojik fenotipleme için bunları göndermek için izin verir. Bu video makalede, uzaktan fenotipleme analizleri için sabitlenmemiş ve perfüzyon hem sabit fare gözler tanıttılar ve aktarmak için teknikler mevcut.

Diseksiyon tekniği high-throughput ekranlarında fenotipleme gerçekleştirmek için doku fiksasyonu fare gözün enükleasyonu göstermektedir.

Uzaktan Yüksek throughput fenotipleme için Fare Göz Enükleasyon

Fare gözü, insan oftalmik hastalıklarının translasyonel çalışmaları için önemli bir genetik modeldir. İnsanlarda maküler dejenerasyon gibi körlüğe yol açan hastalıklar...

Bu video, fare gözünü ve nükleasyonu veya göz küresinin göz çukurundan çıkarılmasını gösterecektir. Göz küresi, alt kapak kenarı ile sınırlanmıştır. Burası medial veya nazal kantustur.Arkada temporal veya lateral kantus yer alır. Üstte üst göz kapağı sınırı bulunmaktadır. Burada bir cerrahi örnek görülmektedir.İğne şeffaf korneayı göstermektedir. Merceğin iris üzerinden birazcık dışarı çıktığını görebiliyoruz. İris, merceği örten kahverengi bölgedir.En önemli cerrahi referans noktası, hemen arkasından ponksiyon yapılacak olan bu beyaz çizgi veya limbustur. Globun arka yarısı limbusun arkasındadır ve bir kas insersiyonunu işaret ediyoruz. Burada kasa karşı globun üzerinde yatan kası ve ardından orbite dolan ve Arian bezini içeren bağ dokusunu görebilirsiniz.Ve son olarak, bu, künt diseksiyon sonucu elde edilen optik sinirin beyaz uzun şerididir. Keskin bir uçla özelleştirilmiş, eğri pansuman pensi kullanarak göz kapaklarını birbirinden ayırarak başlayın. Bu işlem, gözün dışarıya ve uzağa doğru itilmesini sağlar.Penseti dikkatlice orbite ve göz küresinin arkasına yerleştirin, göz küresini sıkmadan arkasından hafifçe sıkıştırın ve öne doğru çekin. Göz küresini değil, bağ dokusunu kavramış olmanız gerekir. Göz küresini yana doğru çevirdiğinizde, beyaz optik sinirle birlikte orbital dokuyu görebilirsiniz.Bu, canthus'tan girip forsepi göz küresinin arkasına ittiğinizi, bağ dokusunu kavradığınızı ve göz küresine baskı uygulamadan ileriye doğru çektiğinizi tekrar göstermek için yapılan ikinci bir diseksiyondur. Tekrar görebileceğiniz üzere, bağ dokusu optik sinirin uzun beyaz şeridinde yer almaktadır. Delici bir yara oluşturmak için, göz küresini bir kas insersiyosundan tutun ve gözü stabilize etmek için tuttuğunuz yerin hemen yanındaki limbus'un arkasından bir iğne yerleştirin.Bu işlem, tespit edicinin göze girmesine olanak tanıyacaktır. Delme işlemini gözü tuttuğunuz yerden uzağa yaparsanız, göz küresi oldukça stabil olmayacak ve gözü sıkıştırmadığınız veya aşırı basınç uygulamadığınız sürece o yarayı oluşturmak zor olacaktır. Ayrıca, göz küresinin hemen arkasındaki tüm bağ dokusunu da kavrayabilirsiniz.Bazı tespit ediciler delinme yarası gerektirmez. Genel olarak, gözün tamamen daldığından emin olmak için gözü, en az 3 cc tespit edici içeren beş cc'lik bir sintilasyon tüpüne koyuyoruz. Perfüzyonla tespit edilmiş hayvanlar için keskin bir diseksiyon gereklidir.Kavisli calibri pens ve kavisli wescott makası kullanıyoruz. Alt göz kapağını calibri pens ile kavrayın. Makası orbital kemiğe yaslayarak yerleştirin ve bağ dokusunu kesmeye başlayın.Göz küresinden uzaklaşan eğriyi kullanır ve boyutlandırmadan kaçınırız. Alt göz kapağı kenarı boyunca, bir kantalustan diğerine kadar gözün herhangi bir bölümü uygun olacaktır. Belirli bir noktada, bağ dokusunun çoğu temizlenmiş olacak ve makasınızı bulbun arkasına kaydırıp onu çekerek uzaklaştırabileceksiniz.İşte bir örnek daha; makaslar orbita yerleştirilir, ancak göz küresi yerine orbital kemiğe doğru tutularak bağ dokusu kesilir. Bu işlem, bir sepet içindeki basketbol topu gibi duran göz küresini serbest bırakmaya başlayacaktır. Göz kapaklarını geri çekmek için pens kullanın ve göz küresinin çevresinde nazik, kısa kesiler yapın.Burada, bağ dokusunu veya bir kas yapışma noktasını Collibra ile kavrayarak göz küresinin orbital bağ dokusundan tamamen kesilip ayrılmasını tamamlıyoruz. Göz küreleri uygun şekilde fikse edildikten sonra, eğer taşınmaları gerekiyorsa, saklama tüpünün etrafına biraz parafilm sarıyoruz.Paketleme, üniversitenizin ve hükümetin yönetmeliklerine uygun olmalıdır. Genellikle bunları, herhangi bir sıvıyı tutması için bir miktar pamuk içeren bir kaba yerleştiriyoruz; bu kabın çok sıkı bir şekilde kapatılması gerekir. Bu nakliye kabı daha sonra bir balonlu naylon torbaya yerleştirilir.Bu, gerekli belgelerle birlikte sıvı laboratuvar sevkiyat paketine yerleştirilir.

mouse-eye-enucleation-for-remote-high-throughput-phenotyping

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol ile fare retina eksplant elektroporasyon yaşayan cis-düzenleyici unsurlar (yani artırıcı / rehberleri) aktivitesini ölçmek için basit ve ucuz bir şekilde açıklamaktadır. DNA hazırlığı, retina diseksiyonu, elektroporasyon, retina eksplant kültür ve fiksasyonu sonrası analizi ve ölçülmesi açıklanmıştır.

Aktivitesi miktarının Cis</emEksplant Elektroporasyon Fare Retina> Düzenleme Elemanları

Source: Jagodzinska, J., et. al., Optik Koherens Tomografi: Fare Retinal Ganglion Hücrelerini Görüntüleme In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  Bu videoda, optik nöropatili genetik olarak değiştirilmiş bir fare modelinde retina katmanlarını görüntülemek ve yapısal değişiklikleri değerlendirmek için spektral alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını gösteriyoruz.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Fare Retinasının İn Vivo Görüntülenmesi

Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar.

A Çok Reproducible ve Kolay Yöntem gerçekleştir In Vivo Göz Enükleasyon

Bu makalede, R26R-Confetti fareleri kullanarak çok renkli bir soy izleme deneyi tasarlama ve gerçekleştirme ilkelerini açıklıyoruz. İlgilenilen diğer dokular için modifiye edilebilen kornea epitel hücrelerinin izlenmesi için özel bir protokol sunuyoruz.

Çok renkli Floresan Reporter Fare kullanma Kornea Hücre Lineage İzleme Bir Yöntem

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

Burada sunulan canlı fare oküler yüzey görüntüleme için bir multifoton mikroskobik platformdur. Floresan transgenik fare hücre çekirdekleri, hücre zarları, sinir lifleri ve oküler yüzey içinde kılcal damarların görüntülenmesi sağlar. Kolaj nasyonal yapılardan elde edilen doğrusal olmayan ikinci harmonik nesil sinyalleri stromal mimariler için etiketsiz görüntüleme sağlar.

Fare Kornea ve Konjonktiva Canlı Görüntüleme için Özel Multifoton Mikroskop platformu

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

İlk olarak 20161'deFernandez-Godino ve arkadaşları tarafından bildirilen bu protokol, Transwell plakalarında bir hafta içinde işlevsel ve polarize bir RPE monolayer oluşturan fare RPE hücrelerini verimli bir şekilde izole etmek ve kültüre etmek için bir yöntem tanımlamaktadır. İşlem yaklaşık 3 saat sürer.

Birincil Fare Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Verimli Diseksiyonu ve Kültürü

Bu yazıda kemirgenlerde oküler mikrodiseksiyon için bir protokol sunulmaktadır. İşlem, göz küresinin niktitasyon zarı (yani üçüncü göz kapağı) ile birlikte enükleasyonunu içerir. Bunu daha sonra arka ve ön göz kapaklarının ayrılması izler.

Kemirgen Gözün Mikrodiseksiyonu

Retina, laminer yapısı boyunca karmaşık uzamsal organizasyon sergiler. Modern mekansal transkriptomik ve dizileme teknikleri, 20 μm kalınlığında doku kesitleri &lt; gerektirir ve bu da retinal araştırma uygulanabilirliklerini sınırlar. Bu taze dondurulmuş kriyoseksiyon yöntemi, düzlemsel uzamsal ilişkileri korurken fare retinasının ince yüz kesitlerini üretir ve laminalar arasında kapsamlı moleküler haritalama sağlar.

En yüz Yüksek Boyutlu Mekansal Moleküler Analiz için Fare Retinasının Kriyoseksiyonu

Bu makale, retinadaki postsinaptik nokta ve mikroglia hareketliliğini görselleştirme ve nicelleştirme yöntemini spinning disk konfokal mikroskopisi kullanarak göstermektedir.

Hasta Sare Retinasında Mikroglia Dinamikleri ve Sinapslarla Etkileşimlerin Canlı Görüntülemesi ve Karakterizasyonu

Öğrenin, yüksek verimli fenotipleme taramaları için fare gözü enükleasyon tekniğini. Bu yöntem, doku fiksasyonu ve anatomik referans noktalarının doğru kullanımıyla araştırmacılara rehberlik eder.

Uzaktan Yüksek throughput fenotipleme için Fare Göz Enükleasyon

Daha fazla video keşfet