Rekombinant Miyelin Oligodendrosit Glikoproteinlerinin İzolasyonu ve Saflaştırılması

MOGtag, Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit çalışmaları için çözündürme ve saflaştırma etiketleriyle kaynaşmış rekombinant bir Miyelin Oligodendrosit Glikoproteinidir.

MOGtag'ı izole etmek için, MOGtag'ı eksprese eden bakteri hücrelerini bir lizis tamponunda askıya alın ve inkübe edin.

Tampondaki enzimler ve deterjanlar zar lipitlerini bozar ve hücre duvarını bozar.

Hücreleri daha fazla parçalamak için sonikat, MOGtag içeren çözünmeyen inklüzyon cisimlerini serbest bırakır.

İnklüzyon cisimciklerini peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı atın, peleti tamponda yeniden süspanse edin ve inkübe edin.

Guanidin hidroklorür ekleyin, ardından MOGtag'ı çözündürmek için inkübe edin.

Çözünür proteinleri yüklü bir nikel reçinesi üzerine aktarın, karıştırın ve MOGtag'ın nikel iyonlarına bağlanmasına izin vermek için çalkalama ile inkübe edin.

Bağlı MOGtag'ı peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın, peleti bir elüsyon tamponunda yeniden süspanse edin ve çalkalayarak inkübe edin.

Elüsyon tamponundaki imidazol, reçineden MOGtag'ı serbest bırakır.

Tekrar santrifüjleyin, saflaştırılmış MOGtag içeren süpernatanı toplayın ve daha fazla analiz için saklayın.

Kültürleri yüksek hızlı santrifüjleme il