JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:15 dk • June 17th, 2025
Ortamda kültürlenmiş periferik sinir sisteminin miyelinli glial hücreleri olan Schwann hücreleri veya SC'ler ile başlayın.
Hücreleri, her iki tarafta elektrotlarla donatılmış kolorimetrik bir tabağa aktarın.
Çanağı nanosaniye darbeli bir elektrik alanına veya nsPEF cihazına yerleştirin ve istenen elektrik alan yoğunluğunu ayarlayın.
Kıvılcımlar görünene kadar elektrotları dikkatlice döndürerek nsPEF darbeleri uygulayın.
Stimülasyondan hemen sonra elektrotları ayırın ve hücreleri kültürlemeye devam edin.
nsPEF, SC membranlarını bozarak kalsiyum akışına izin veren geçici nanogözenekler oluşturur. Membranlar sonunda yeniden mühürlenir.
Hücre içi kalsiyum, kalsiyum bağlayıcı proteinleri aktive ederek hücre döngüsü ilerlemesinde rol oynayan genleri yukarı regüle eden sinyal yollarını tetikler.
Sürekli kalsiyum sinyalizasyonu ayrıca, SC'lerin bir onarım fenotipine farklılaşmasını ve ardından proliferasyonu tetikleyen transkripsiyon faktörlerini aktive eder.
Ek olarak, nöronal sağkalımı ve büyümeyi destekleyen nörotrofik faktörlerin salgılanması artar.
Model şimdi nsPEF ile uyarılan SK'lerin yaralanma sonrası periferik sinir rejenerasyonundaki rolünü incelemeye hazırdır.
Başlamak için, kültürlenmiş RSC96 hücrelerini 1 mililitre DMEM kültür ortamında yeniden süspanse edin ve bunları her iki tarafta elektrotlar bulunan kolorimetrik kaplara aktarın. Cihazın güç anahtarını açın ve elektrik alanının yoğunluğunu ayarlamak için düğmeyi çevirin. Dikkatlice, kıvılcımlar görünene kadar elektrotları döndürün, bu da hücrelerin önceden ayarlanmış alan kuvveti yoğunluklarına göre 5 nanosaniye darbeli elektrik alanı almasına izin verir. Tedaviden sonra iki elektrodu hemen ayırın.