JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:25 dk • August 7th, 2025
Yüksek verimli retrograd taşıma veya HiRet viral vektör içeren bir mikro iğne ile bir mikro enjektör alın.
HiRet virüsü zarfındaki glikoproteinler, sinapslar yoluyla nöronlara girişini kolaylaştırır. Virüs ayrıca bir floresan proteini kodlayan bir gen taşır.
Açıkta kalan lomber omurilik 1 ila 4 olan anestezi uygulanmış bir sıçan alın.
Omuriliğin orta hattını referans olarak kullanarak, iğneyi enjeksiyon bölgesinin üzerine yerleştirin.
İğneyi omuriliğe indirin.
Virüsü kontrollü bir oranda uygulamaya başlayın.
İğneyi çekmeden önce viral difüzyon için yeterli zaman tanıyın.
Nöronal reseptörler, viral glikoproteinlere bağlanarak sinaps yoluyla virüs girişini kolaylaştırır ve akson yoluyla somaya taşınır, bu süreç retrograd taşıma olarak adlandırılır.
Viral gen, konakçı genomu ile bütünleşerek floresan proteinlerin ekspresyonunu sağlar.
Bu virüsler ayrıca bağlı nöronlardan geçerek nöronal yolların izlenmesini sağlar.
İğneyi omuriliğin orta hattına yerleştirin ve iğneyi yanal olarak 0,8 milimetre yönlendirmek için mikromanipülatör üzerindeki Vernier ölçeğini kullanın. Daha sonra iğneyi girinti yapana kadar omuriliğe indirin, ancak dura'yı delmeyin. Ve iğne ucu 1,5 milimetre derinliğe kadar batana kadar durayı iğneyle delmek için hızlı bir döndürme hareketi kullanın.
İğne yerleştirildikten sonra, enjektörü virüsü dakikada 400 nano litre hızında iletecek şekilde programlayın ve boya cephesinin ilerlemesini gözlemleyerek virüsün omuriliğe girdiğini doğrulayın. Enjeksiyon bittikten sonra, bir sonraki enjeksiyon bölgesinde konumlandırmak için iğneyi yavaşça geri çekmeden önce, virüsün yayılmasını kolaylaştırmak için iğnenin omurilikte iki ila beş dakika dinlenmesine izin verin.