Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Aşağıdaki deneyin genel amacı, bilinçli stressiz farelerde tüm vücut ve dokuya özgü insülin etkisini onları ele almadan değerlendirmektir. Bu, infüzyonlar için juguler ven içine bir kateter ve kan örnekleri elde etmek için karotis artere bir kateter cerrahi olarak implante edilerek elde edilir. Beş ila yedi günlük bir iyileşme döneminden sonra, beş saat aç bırakılan farelere fizyolojik hiperinsülinemi elde etmek için insülin verilir.

Glikoz seviyeleri daha sonra arteriyel kateterden ölçülür ve glikoz infüzyon hızı ayarlanarak U glisemi korunur. Bu deney, U glisemisini sürdürmek için gerekli olan glikoz infüzyon hızı ile insülin etkisi arasındaki doğrudan ilişkiye dayalı olarak tüm vücut insülin duyarlılığındaki farklılıkların ölçülmesine izin verir. Bu tekniğin, kuyruğu kesmek gibi kan örneklemesi için mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, cerrahi olarak implante edilen arteriyel kateterin bize fareye vasküler erişim sağlamasıdır, böylece fareyi tutmak zorunda kalmadan kan örnekleri alabiliriz.

Bu, bu deneyleri stressiz ve sınırsız farelerle yapmamıza izin veriyor. Arteriyel kateter, eğimli bir PE 10 boru parçasının, PE 10'un selden 0.9 santimetre uzanacağı şekilde altı santimetrelik bir boru parçasına sokulmasıyla yapılır. Venöz kateter, yakalı altı santimetrelik bir SEL tüpü parçasıdır.

Masa, iki adet 1,3 santimetre 25 gauge paslanmaz çelik konektörün (Ben) her birine yaklaşık 120 derecelik bir açıyla üç santimetrelik PE 20 parçasının sokulmasıyla yapılmıştır. Bunlar, burada gösterildiği gibi bir parça tıbbi silikon yapıştırıcıya yerleştirilir Kateter implantasyonuna başlamak için, anestezi uygulanmış bir fareyi steril teknik kullanarak temiz bir çalışma yüzeyine yerleştirin. Orta hattın beş milimetre sağında bir kesi yapın.

Sağ juguler veni izole edin. Sefalik dikkatlice ligate edin, ipek sütürle sonlandırın ve kodal uçta başka bir sütür parçasını gevşek bir şekilde bağlayın. Ardından, yaylı makasla sefalik ligatür kısmından kesin ve kateteri kısıtlayıcı boncuğa kadar yerleştirin.

Boncuğun arkasına bir dikiş bağlayın ve kateterin serbest ucunu bir numune alma şırıngasına bağlayarak kateterin numune aldığını onaylayın. Arteriyel kateteri yerleştirmek için, sternumun beş milimetre solunda küçük bir kesi yapın ve ilk kesiye sefalik yapın. Sol karotis arteri izole edin, ardından sefalik bağlayın.

İpek sütürle bitirin ve gevşek bir şekilde düğümleyin. Açıkta kalan damarın nedensel ucunda başka bir dikiş parçası. Ardından, kabın kodal ucunu sıkıştırın.

Ve yaylı makasla bağlanan ucun hemen altından kesin. Kateteri dikkatlice kelepçeye kadar yerleştirin. Kelepçeyi dikkatlice serbest bırakın ve kateteri Astic P bağlantısına ilerletin.

Ligatürleri katetere güvenli bir şekilde bağlayın ve kateterin serbest ucunu bir numune alma şırıngasına bağlayarak kateterin numune aldığını onaylayın. Daha sonra, hayvanı ters çevirin ve kürek kemikleri tüneli arasında küçük bir kesi yapın, öndeki kesilerden arkadaki bu kesiğe kadar deri altında 14 gauge bir iğne yapın. Kateterleri farenin arkasında dıştan çıkarmak için iğneden geçirin.

Arteriyel ve venöz kateterleri, örnekleme erişimi veya masa için fare antenindeki uygun konektörlere bağlayın. Ardından, masayı omuz bıçakları arasındaki kesiye yerleştirin. Her iki kesiyi de naylon dikişle kapatın.

Her iki kateterin açıklığını onaylayın. Fareyi iyileşmek için ılık, temiz bir kafese koyun ve insülin kıskpından en az beş gün önce farenin iyileşmesine izin verin. Farelerde hiperinsülinemik u glisemik klemp gerçekleştirmenin en zor adımı, U glisemiyi korumaya çalışmaktır.

Fareler çok hızlı bir metabolizmaya sahiptir ve glikoz seviyeleri deney süresince önemli ölçüde değişebilir. Bunun için gereken şey, bir farenin glikoz seviyelerinin bir deney boyunca nasıl değişeceğine dair bir his geliştirmek ve daha sonra U glisemisini korumak için glikoz infüzyon hızının nasıl ayarlanacağı konusunda biraz pratiktir. Standart bir kelepçe için kurulum burada gösterilmiştir.

Üç infüzyon sekizli, glikoz insülin ve yıkanmış eritrositler, bir fırdöndüye bağlı dört bir konektöre bağlanır ve farenin üzerinde asılı kalır. Fırdöndünün infüzyon portu venöz katetere bağlanır. Fareyi bağlamadan önce, tüm sekiz satırı tuzlu su ile doldurun.

Daha sonra, örnekleme hattını heparinize tuzlu su ile doldurun. Temizleme şırıngasının döner üst kısmına bağlı heparinize salin içeren bir şırınga bırakın. Kelepçenin başlamasından beş ila altı saat önce oruç tutmaya başlayın.

Üç saat boyunca hızlı çalışın, fareyi tartın ve venöz ve arteriyel kateterleri sırasıyla infüzyon ve örnekleme hatlarına bağlayın. Kelepçenin başlamasından 15 dakika önce, el tipi bir glukometreye boş bir glikoz damlası yerleştirin. Daha sonra, hattan herhangi bir salini çıkarmak ve temizleme şırıngasını çıkarmak için temizleme şırıngasına yaklaşık 50 mikrolitre kan çekin.

Tüpün sonunda oluşan kan damlasına glikoz şeridine dokunarak kan şekeri seviyesini ölçün. Daha sonra, örnekleme hattına künt iğneli bir şırınga yerleştirin ve 50 mikrolitre kan çekin. Kanı EDTA kaplı bir tüpe dağıtın ve bazal hormon ve metabolitlerin ölçümü için plazmayı toplamak üzere tüpü santrifüjleyin.

Bu noktada, temizleme şırıngasını tekrar takın ve pistonu yukarı çekin. Hava kabarcıklarını gidermek için, başlangıçta çekilen 50 mikrolitre kanı tekrar infüze edin. Glükometreden kan şekeri değerini not edin.

10 dakika sonra, kan şekeri ölçümünü tekrarlamak için glukometre ve temizleme şırıngasını kullanın ve ardından başka bir plazma örneği elde etmek için 50 mikrolitre daha kan alın. İkinci temel ölçümler alındıktan sonra, glikoz, insülin ve salinle yıkanmış eritrositler için infüzyon hatlarını dört konektöre kadar doldurun. Dört konektörü döner infüzyon portuna bağlı boruya bağlayın.

Tuzlu suyla yıkanmış eritrositleri infüze ederek başlayın. Çalışma süresi boyunca örneklenen toplam kan hacmini değiştirmek için infüzyon hızını ayarlayın. Eritrosit infüzyonu sekizinci fareye ulaştığında, insülin ve glikoz infüzyonlarına başlayın.

Bu zaman sıfır dakikaya eşittir. İnsülin önceden belirlenmiş sabit bir oranda infüze edilir. İlk glikoz infüzyon hızı, temel kan şekeri seviyelerine ve önceki deneyime dayalı olarak tahmin edilir.

Önümüzdeki iki saat boyunca, glükometre ile kan şekeri ölçümleri yapın ve hedef u glisemiyi korumak için glikoz infüzyon hızını ayarlayın 10 dakikalık aralıklarla, yeni glikoz okumalarını ve glikoz infüzyon hızlarını 100 dakika ve 120 dakikada kaydedin, plazma insülini ve diğer hormonların veya metabolitlerin ölçümü için ek kan toplayın. Burada gösterilen, klemp prosedürü boyunca glikoz seviyelerinin zaman seyridir ve klemp boyunca hem yemle beslenen hem de yüksek yağla beslenen farelerde U gliseminin ne kadar iyi korunduğunu gösterir. Glikoz infüzyon hızının bir zaman seyri, yüksek yağlı beslenen grupta u glisemiyi korumak için gerekli oranın önemli ölçüde daha düşük olduğunu gösterir ve bu da tüm vücut insülin etkisinde bozulmaya işaret eder.

Yüksek yağlı beslenen grupta hem açlık hem de klemp insülin seviyeleri de daha yüksektir ve insüline dirençli bir fenotipin varlığını daha da destekler. Bu farelerde, endojen glikoz görünüm oranını tahmin etmek için tritiye edilmiş glikoz kullanılır. Endo a, hepatik glikoz üretiminin bir indeksi iken, insülin kontrol farelerinde endo A'yı tamamen baskılar.

Yüksek yağlı bir diyetle beslenen farelerde baskılama bozulur. Benzer şekilde, TRID glikozu, tüm vücut glikozunun kaybolma oranını tahmin etmek için kullanılır. Rd: İnsülinin RD'yi uyarma yeteneği, yüksek yağlı bir diyetle beslenen farelerde tehlikeye girer.

Dokuya özgü glikoz alımının bir ölçüsü olan glikoz metabolik indeksi RG'yi değerlendirmek için karbon 14 içeren iki deoksi glikoz kullanılır. Bu örnekte görüldüğü gibi, yüksek yağlı bir diyetle beslenen farelerde iskelet kasına insülin ile uyarılan glikoz alımı bozulmuştur. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, arteriyel ve venöz kateterleri implante etmek için gereken mikrocerrahi ile mücadele edeceklerdir.

Ameliyat çok özel beceriler gerektirir ve hiperinsülinemik U glisemik klemp ameliyatında çok ustalaşmak için birkaç ay boyunca sürekli pratik gerektirir, yine zorluk, çok yüksek metabolizmaya sahip bir hayvan modelinde U glisemiyi korumaya çalışmaktır.