Name: Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: Öğrenin hiperinsülinemik-öglisemik kelepçe yöntemiyle farelerde insülin duyarlılığını değerlendirmeyi. Bu teknik, bilinçli ve serbest farelerde stresi en aza indirerek metabolik araştırmalarda doğru veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Vanderbilt Mouse Metabolik fenotipleme Merkezi Hibe 5-U24-DK059637-10 tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li>
<li>Berglund, E. D., Li, C. Y., Poffenberger, G., Ayala, J. E., Fueger, P. T., Willis, S. E., Jewell, M. M., Powers, A. C., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+metabolism+in+vivo+in+four+commonly+used+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Glucose metabolism in vivo in four commonly used inbred mouse strains.</a> Diabetes. 57, 1790-1799 (2008).</li>
<li>Niswender, K. D., Shiota, M., Postic, C., Cherrington, A. D., Magnuson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+increased+glucokinase+gene+copy+number+on+glucose+homeostasis+and+hepatic+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Effects of increased glucokinase gene copy number on glucose homeostasis and hepatic glucose metabolism.</a> J. Biol. Chem. 272, 22570-22575 (1997).</li>
<li>Kim, H. J., Higashimori, T., Park, S. Y., Choi, H., Dong, J., Kim, Y. J., Noh, H. L., Cho, Y. R., Cline, G., Kim, Y. B., Kim, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+interleukin-6+and+-10+on+skeletal+muscle+and+liver+insulin+action+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Differential effects of interleukin-6 and -10 on skeletal muscle and liver insulin action in vivo.</a> Diabetes. 53, 1060-1067 (2004).</li>
<li>Kim, J. K., Fillmore, J. J., Chen, Y., Yu, C., Moore, I. K., Pypaert, M., Lutz, E. P., Kako, Y., Velez-Carrasco, W., Goldberg, I. J., Breslow, J. L., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+overexpression+of+lipoprotein+lipase+causes+tissue-specific+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific overexpression of lipoprotein lipase causes tissue-specific insulin resistance.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 98, 7522-7527 (2001).</li>
<li>Kim, J. K., Fillmore, J. J., Gavrilova, O., Chao, L., Higashimori, T., Choi, H., Kim, H. J., Yu, C., Chen, Y., Qu, X., Haluzik, M., Reitman, M. L., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+rosiglitazone+on+skeletal+muscle+and+liver+insulin+resistance+in+A-ZIP%2FF-1+fatless+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Differential effects of rosiglitazone on skeletal muscle and liver insulin resistance in A-ZIP/F-1 fatless mice.</a> Diabetes. 52, 1311-1318 (2003).</li>
<li>Kim, J. K., Fillmore, J. J., Sunshine, M. J., Albrecht, B., Higashimori, T., Kim, D. W., Liu, Z. X., Soos, T. J., Cline, G. W., O'Brien, W. R., Littman, D. R., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKC-theta+knockout+mice+are+protected+from+fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">PKC-theta knockout mice are protected from fat-induced insulin resistance.</a> J. Clin. Invest. 114, 823-827 (2004).</li>
<li>Kim, J. K., Gavrilova, O., Chen, Y., Reitman, M. L., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+insulin+resistance+in+A-ZIP%2FF-1+fatless+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Mechanism of insulin resistance in A-ZIP/F-1 fatless mice.</a> J. Biol. Chem. 275, 8456-8460 (2000).</li>
<li>Kim, J. K., Gimeno, R. E., Higashimori, T., Kim, H. J., Choi, H., Punreddy, S., Mozell, R. L., Tan, G., Stricker-Krongrad, A., Hirsch, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+fatty+acid+transport+protein+1+prevents+fat-induced+insulin+resistance+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Inactivation of fatty acid transport protein 1 prevents fat-induced insulin resistance in skeletal muscle.</a> J. Clin. Invest. 113, 756-763 (2004).</li>
<li>Kim, J. K., Kim, H. J., Park, S. Y., Cederberg, A., Westergren, R., Nilsson, D., Higashimori, T., Cho, Y. R., Liu, Z. X., Dong, J., Cline, G. W., Enerback, S., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte-specific+overexpression+of+FOXC2+prevents+diet-induced+increases+in+intramuscular+fatty+acyl+CoA+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Adipocyte-specific overexpression of FOXC2 prevents diet-induced increases in intramuscular fatty acyl CoA and insulin resistance.</a> Diabetes. 54, 1657-1663 (2005).</li>
<li>Kim, J. K., Kim, Y. J., Fillmore, J. J., Chen, Y., Moore, I., Lee, J., Yuan, M., Li, Z. W., Karin, M., Perret, P., Shoelson, S. E., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+fat-induced+insulin+resistance+by+salicylate%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Prevention of fat-induced insulin resistance by salicylate.</a> J. Clin. Invest. 108, 437-446 (2001).</li>
<li>Kim, J. K., Michael, P. revis, Peroni, S. F., Mauvais-Jarvis, O. D., Neschen, F., Kahn, S., Kahn, B. B., R, C., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redistribution+of+substrates+to+adipose+tissue+promotes+obesity+in+mice+with+selective+insulin+resistance+in+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Redistribution of substrates to adipose tissue promotes obesity in mice with selective insulin resistance in muscle.</a> J. Clin. Invest. 105, 1791-1797 (2000).</li>
<li>Kim, J. K., Zisman, A., Fillmore, J. J., Peroni, O. D., Kotani, K., Perret, P., Zong, H., Dong, J., Kahn, C. R., Kahn, B. B., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+toxicity+and+the+development+of+diabetes+in+mice+with+muscle-specific+inactivation+of+GLUT4%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Glucose toxicity and the development of diabetes in mice with muscle-specific inactivation of GLUT4.</a> J. Clin. Invest. 108, 153-160 (2001).</li>
<li>Haluzik, M., Gavrilova, O., LeRoith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha+deficiency+does+not+alter+insulin+sensitivity+in+mice+maintained+on+regular+or+high-fat+diet%3A+hyperinsulinemic-euglycemic+clamp+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha deficiency does not alter insulin sensitivity in mice maintained on regular or high-fat diet: hyperinsulinemic-euglycemic clamp studies.</a> Endocrinology. 145, 1662-1667 (2004).</li>
<li>Haluzik, M., Yakar, S., Gavrilova, O., Setser, J., Boisclair, Y., LeRoith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+in+the+liver-specific+IGF-1+gene-deleted+mouse+is+abrogated+by+deletion+of+the+acid-labile+subunit+of+the+IGF-binding+protein-3+complex%3A+relative+roles+of+growth+hormone+and+IGF-1+in+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance in the liver-specific IGF-1 gene-deleted mouse is abrogated by deletion of the acid-labile subunit of the IGF-binding protein-3 complex: relative roles of growth hormone and IGF-1 in insulin resistance.</a> Diabetes. 52, 2483-2489 (2003).</li>
<li>Haluzik, M. M., Lacinova, Z., Dolinkova, M., Haluzikova, D., Housa, D., Horinek, A., Vernerova, Z., Kumstyrova, T., Haluzik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+insulin+sensitivity+after+peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha+agonist+treatment+is+accompanied+by+paradoxical+increase+of+circulating+resistin+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Improvement of insulin sensitivity after peroxisome proliferator-activated receptor-alpha agonist treatment is accompanied by paradoxical increase of circulating resistin levels.</a> Endocrinology. 147, 4517-4524 (2006).</li>
<li>Kim, H., Haluzik, M., Asghar, Z., Yau, D., Joseph, J. W., Fernandez, A. M., Reitman, M. L., Yakar, S., Stannard, B., Heron-Milhavet, L., Wheeler, M. B., LeRoith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha+agonist+treatment+in+a+transgenic+model+of+type+2+diabetes+reverses+the+lipotoxic+state+and+improves+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha agonist treatment in a transgenic model of type 2 diabetes reverses the lipotoxic state and improves glucose homeostasis.</a> Diabetes. 52, 1770-1778 (2003).</li>
<li>Deibert, D. C., DeFronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epinephrine-induced+insulin+resistance+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Epinephrine-induced insulin resistance in man.</a> J. Clin. Invest. 65, 717-721 (1980).</li>
<li>Rizza, R. A., Cryer, P. E., Haymond, M. W., Gerich, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+mechanisms+for+the+effects+of+epinephrine+on+glucose+production+and+clearance+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Adrenergic mechanisms for the effects of epinephrine on glucose production and clearance in man.</a> J. Clin. Invest. 65, 682-689 (1980).</li>
<li>Nunemaker, C. S., Wasserman, D. H., McGuinness, O. P., Sweet, I. R., Teague, J. C., Satin, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+secretion+in+the+conscious+mouse+is+biphasic+and+pulsatile%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Insulin secretion in the conscious mouse is biphasic and pulsatile.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 290, 523-529 (2006).</li>
<li>Nunemaker, C. S., Zhang, M., Wasserman, D. H., McGuinness, O. P., Powers, A. C., Bertram, R., Sherman, A., Satin, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Individual+mice+can+be+distinguished+by+the+period+of+their+islet+calcium+oscillations%3A+is+there+an+intrinsic+islet+period+that+is+imprinted+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Individual mice can be distinguished by the period of their islet calcium oscillations: is there an intrinsic islet period that is imprinted in vivo.</a> Diabetes. 54, 3517-3522 (2005).</li>
<li>Halter, J. B., Beard, J. C., Jr, P. orte, D, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+function+and+stress+hyperglycemia%3A+plasma+glucose+and+epinephrine+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Islet function and stress hyperglycemia: plasma glucose and epinephrine interaction.</a> Am. J. Physiol. 247, 47-52 (1984).</li>
<li>Jacobson, L., Ansari, T., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counterregulatory+deficits+occur+within+24+h+of+a+single+hypoglycemic+episode+in+conscious%2C+unrestrained%2C+chronically+cannulated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Counterregulatory deficits occur within 24 h of a single hypoglycemic episode in conscious, unrestrained, chronically cannulated mice.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 290, 678-684 (2006).</li>
<li>Jacobson, L., Ansari, T., Potts, J., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoid-deficient+corticotropin-releasing+hormone+knockout+mice+maintain+glucose+requirements+but+not+autonomic+responses+during+repeated+hypoglycemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoid-deficient corticotropin-releasing hormone knockout mice maintain glucose requirements but not autonomic responses during repeated hypoglycemia.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 291, 15-22 (2006).</li>
<li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., James, F. D., Julien, B. M., Wasserman, D. H., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glucagon-like+peptide-1+receptor+regulates+endogenous+glucose+production+and+muscle+glucose+uptake+independent+of+its+incretin+action%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The glucagon-like peptide-1 receptor regulates endogenous glucose production and muscle glucose uptake independent of its incretin action.</a> Endocrinology. 150, 1155-1164 (2009).</li>
<li>Fueger, P. T., Bracy, D. P., Malabanan, C. M., Pencek, R. R., Granner, D. K., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hexokinase+II+overexpression+improves+exercise-stimulated+but+not+insulin-stimulated+muscle+glucose+uptake+in+high-fat-fed+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Hexokinase II overexpression improves exercise-stimulated but not insulin-stimulated muscle glucose uptake in high-fat-fed C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 53, 306-314 (2004).</li>
<li>Fueger, P. T., Bracy, D. P., Malabanan, C. M., Pencek, R. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distributed+control+of+glucose+uptake+by+working+muscles+of+conscious+mice%3A+roles+of+transport+and+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Distributed control of glucose uptake by working muscles of conscious mice: roles of transport and phosphorylation.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 286, 77-84 (2004).</li>
<li>Fueger, P. T., Heikkinen, S., Bracy, D. P., Malabanan, C. M., Pencek, R. R., Laakso, M., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hexokinase+II+partial+knockout+impairs+exercise-stimulated+glucose+uptake+in+oxidative+muscles+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hexokinase II partial knockout impairs exercise-stimulated glucose uptake in oxidative muscles of mice.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 285, 958-963 (2003).</li>
<li>Fueger, P. T., Hess, H. S., Posey, K. A., Bracy, D. P., Pencek, R. R., Charron, M. J., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+exercise-stimulated+muscle+glucose+uptake+by+GLUT4+is+dependent+on+glucose+phosphorylation+capacity+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Control of exercise-stimulated muscle glucose uptake by GLUT4 is dependent on glucose phosphorylation capacity in the conscious mouse.</a> J. Biol. Chem. , (2004).</li>
<li>Fueger, P. T., Li, C. Y., Ayala, J. E., Shearer, J., Bracy, D. P., Charron, M. J., Rottman, J. N., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+kinetics+and+exercise+tolerance+in+mice+lacking+the+GLUT4+glucose+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glucose kinetics and exercise tolerance in mice lacking the GLUT4 glucose transporter.</a> J. Physiol. 582, 801-812 (2007).</li>
<li>Shearer, J., Coenen, K. R., Pencek, R. R., Swift, L. L., Wasserman, D. H., Rottman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+chain+fatty+acid+uptake+in+vivo%3A+comparison+of+%5B125I%5D-BMIPP+and+%5B3H%5D-bromopalmitate%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">Long chain fatty acid uptake in vivo: comparison of [125I]-BMIPP and [3H]-bromopalmitate.</a> Lipids. 43, 703-711 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe, ya da insülin kelepçe, in vivo olarak insülin etkisini değerlendirmek için &quot;altın standart&quot; yöntemi yaygın olarak kabul edilir. Bu teknik, insan, köpek, sıçan ve fareler de dahil olmak üzere çeşitli türlere uygulanan olmuştur. Metabolik bozukluklar için transgenik fare modelleri, sayıları giderek artan göz önüne alındığında, fare kullanmak için tekniğin minyatürleştirme, metabolik araştırma için önemli ilerlemeler sağladı. Insülin kelepçe arkasındaki kavramlar basit olmasına karşın, uygulamada insülin kelepçe deneyler için farklı yaklaşımlar vardır. Deney yapıldığı şekilde 1 Elde edilen sonuçlar, etkiler, çünkü bu önemsiz bir nokta değildir. Burada Vanderbilt MMPC tarafından kullanılan protokol mevcut. Başkalarının bizim protokol ve arasındaki temel ayrım, biz kan örnekleri elde etmek için bir arteriyel kateter kullanılmış olmasıdır. Bu obt, daha yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım aksinekuyruk 4, 7, 11, 12, 14-17 ucu kesilmesinin kan örnekleri aining. Arteriyel kateter numune alma avantajı, bilinçli ve pervasız bir fare deneyi yapılır. Örnekleme kuyruk genellikle kısıtlama gerektirir ve büyük kan örnekleri 1 makinasını satın aldığı zaman stres endeksleri artar. Stres hormonları endojen glukoz üretimini teşvik etmek ve glikoz bertaraf 18, 19 olumsuz, potansiyel bir insülin dirençli fenotip görünüm vererek. Kesilmiş kuyruk Örnekleme stresli doğası nedeniyle özel Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu onayı gerekebilir. Arteriyel kateterizasyon prosedürü, fare kuyruğu kesilmesinin stresi önlemek için geliştirilmiştir. Insülin kelepçeler yerine bir önemli yönü euglycemia korumak için yeteneğidir. Doğru gir, kan şekeri okumalara göre ayarlanır nasıl olması gerektiği tahmin algoritmaları vardır. Ameliyat gibi,insülin kelepçe deneylerini personelin deneyimi ile sadece makul euglycemia korumak yeterli olacak. Çünkü onların yüksek metabolizma hızı Fareler üzerinde yapılan çalışmalarda elde edilen veriler, doğal gürültülü olacağına dikkat etmek önemlidir. Bu, glikoz ve Gir kursları ve plazma insülin, endoRa, Rd ve sonuçlarını yorumlamak için herhangi bir okuyucu yeteneği önemli Rg mutlak değerler de dahil olmak üzere veri tam bir sunum yapar. Fare (insanlarda oranı yaklaşık 5 kat daha yüksek) yüksek glukoz akı glikoz örnekleme yüksek frekanslı garanti. Farenin kan hacmi sınırlı olmakla birlikte, en az bir kez her 10 dakikada bir örnekleme frekansı, yeterli bir kelepçe elde edildiğine emin olmak için gereklidir. Şekil 4&#39;te görüldüğü gibi, kelepçe insülin düzeyleri gruplar arasında farklı olabilir. Bu tür diyet müdahaleler, transgenik manipülasyonlar veya arka plan suşları farklılıkları gibi faktörler sülfüroz etkileyebilir.daha sonra kelepçe insülin düzeylerini etkileyen ting insülin seviyeleri. Kelepçe insülin seviyeleri farklı olduğunda sonuçlarını yorumlama sorunlu olabilir. Bu deneysel gruplar arasında eşdeğer kelepçe insülin düzeylerine ulaşmak insülin infüzyonu oranlarını belirlemek için pilot deneyler tarafından ele alınabilir. Alternatif olarak, somatostatin, pankreatik hormon salgılanması inhibe etmek için kullanılır, ve insülin ve glukagon deneysel kontrol fiyatla değiştirilebilir. Bu ikinci yaklaşım, farelere göre fareler üzerinde daha yaygın, insülin kelepçeler yapılır. Bu deneysel yaklaşımlar alınmadığı takdirde, kararlı devlet Gir kelepçe insülin düzeyi normalize edilebilir, ya da bir insülin duyarlılığı indeksi (S) S I = Gir / (G • ΔI), kelepçe veri elde edilebilir G kararlı durum glukoz konsantrasyonu ve ΔI, açlık ve kelepçe insülin konsantrasyonları arasındaki fark. Bir varsayım ya da yaklaşımı ile elde edilen kelepçe insülin düzeyi olduğunuinsülin duyarlılığı doğrusal çalışılan gruba göre insülin düzeyi ilgili aralığında. İnsülin direnci ve insülin hassas gruplar karşılaştırırken Bu ikinci varsayım geçerli olmayabilir. İdeal olarak, bir insülin doz yanıt eğrisi uygun insülin infüzyonu seçmek için oluşturulmalıdır. Ancak, ilave deneyler için gereğinin, bu nadiren yapılır. Arteriyel kateterizasyon tarafından sağlanan çok yönlülük, deneysel yaklaşımlara öglisemik kelepçeler ötesine uzanır. Örneğin, glukoz, açlık kan şekeri göre hiperglisemi korumak için bir değişken hızda infüze olduğu hiperglisemik kelepçeler, in vivo 2, 20, 21, endojen pankreatik fonksiyonu değerlendirmek için kullanılabilir . Bu test sırasında, ilk faz insülin salgılanması ölçümü, kan örnekleri sık sık satın alma (yani her 2-5 dakikada bir), kuyruk ucu örnekleri elde etmek mümkün değildir gerektirir. Ayrıca,kuyruk örnekleme kaynaklanan artmış katekolaminler insülin salgılanması zarar ve glukagon sekresyonunu 22 artırabilirsiniz. Insülin kelepçe protokolü de glukoz düzeyleri karşı-düzenleyici yanıt 2, 23, 24 değerlendirmek için göreceli hipoglisemi düşmek için izin verecek şekilde modifiye edilebilir. Arteriyel kateterizasyon da 25-30 egzersiz sırasında glikoz metabolizmasının dinamikleri değerlendirmek için kullanılabilir. Bu, tek bir zaman noktasında yapılan geleneksel yaklaşımları içinde önemli oranda avantajlı öncesi ve sonrası egzersiz veya izole kasları ex vivo . Burada sunulan teknikleri de sadece glikoz değil, aynı zamanda yağ asidi metabolizması 31 değerlendirmek için kullanılabilir.

bilinçli mesnetlenmemiş fare hiperinsülinemik öglisemik kelepçeleri

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Tip 2 diyabet, insülin eylem bir kusur ile karakterizedir. Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe, ya da insülin kelepçe, in vivo olarak insülin etkisini değerlendirmek için &quot;altın standart&quot; yöntemi yaygın olarak kabul edilir. Bir insülin klemp sırasında, hiperinsülinemi sürekli insülin infüzyonu ile elde edilir. Euglycemia bir değişken faizli birlikte glukoz infüzyonu ile korunur. Bu değişken glukoz infüzyon hızı (Gir) deney boyunca kısa aralıklarla kan şekeri ölçümü ve buna göre ayarlayarak Gir tarafından belirlenir. Gelişmiş insülin eylem ile fareler daha büyük bir Gir gir, tüm vücut insülin eylem göstergesidir. Insülin kelepçe izotopik 2 idaresi dahil edebilirsiniz [14 C] deoksiglukoz doku-spesifik glukoz alımını değerlendirmek ve [3 - 3 H] glukoz, insülin endojen glikoz görünüm (endoRa) oranı bastırmak için yetenek, bir marker değerlendirmek için hepatik glukoz üretimini teşviktüm vücut glukoz ortadan kalkması (Rd) oranı. Metabolik hastalık genetik fare modellerinde kullanmak için insülin kelepçe minyatürleştirme diyabet araştırma önemli ilerlemelere yol açmıştır. Insülin kelepçeler gerçekleştirmek için yöntemleri, laboratuarlar arasında değişir. Bir insülin kelepçe yapıldığı şekilde elde edilen sonuçlar önemli ölçüde etkileyebilir dikkat etmek önemlidir. Biz bilinçli fareler 1 yanı sıra, çeşitli kelepçe teknikleri kullanarak 2, yaygın olarak kullanılan dört kendilenmiş fare suşlarının metabolik yanıt bir değerlendirme insülin kelepçeler performans için farklı yaklaşımlar kapsamlı bir değerlendirme yayınlandı. Burada insülin kelepçeler Vanderbilt Mouse Metabolik fenotipleme Merkezi (: www.mc.vanderbilt.edu / mmpc URL MMPC) tarafından geliştirilen, bilinçli, dizginlenmemiş fareler üzerinde gerçekleştirmek için bir protokol mevcut. Bu, insülin klemp sırasında kullanılan kateter implante yöntemi bir açıklamasını içerir. Tarafından istihdam protokolüVanderbilt MMPC benzersiz bir iki kateter sistemi 3 kullanır. Bir infüzyonlar için juguler ven kateteri yerleştirilir. Kan örneklemesi için fare yavaşlatmaya veya işlemek için gerek kalmadan sağlayan karotis arter, ikinci bir kateter yerleştirilir. Bu teknik, kuyruğu kopmuş ucundan örnek insülin kelepçeler sırasında kan örnekleri elde etmek için en yaygın yöntem için önemli bir avantaj sağlar. Bu ikinci yöntemin aksine, bir arteriyel kateter örnekleme fare 1 stresli değildir. Ayrıca, doku-spesifik insülin etkisini değerlendirmek için izotop tracer infüzyonları kullanmak için yöntemler açıklanmaktadır. Biz de uygun insülin kelepçeler elde edilen sonuçların sunumu için kılavuzlar sağlar.

Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe, ya da insülin kelepçe, insülin etkisini değerlendirmek için altın standart<em&gt; In vivo</em&gt;. Farelerde insülin kelepçeler gerçekleştirmek için bir yöntem açıklanmıştır. Bu, en az stres ile, bilinçli, dizginlenmemiş farelerde yapılan deneylerde izin verir arteriyel kateterizasyon için bir yöntem içerir.

Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Tip 2 diyabet, insülin etkisindeki bir kusur ile karakterizedir. Hiperinsülinemik-öglisemik klemp veya insülin klempi, yaygın olarak "altın...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, bilinçli ve strese girmemiş farelerde, farelere dokunmadan tüm vücut ve dokuya özgü insülin etkisini değerlendirmektir. Bu işlem, infüzyonlar için juguler vene ve kan örnekleri almak için karotis arterine cerrahi olarak kateter yerleştirilerek gerçekleştirilir. Beş ila yedi günlük bir iyileşme döneminden sonra, beş saat boyunca aç bırakılan farelere fizyolojik hiperinsülinemi sağlamak amacıyla insülin infüzyonu yapılır.Ardından arteriyel kateterden glukoz seviyeleri ölçülür ve glukoz infüzyon hızı ayarlanarak U glisemi korunur. Bu deney, U glisemi düzeyini korumak için gerekli olan glukoz infüzyon hızı ile insülin etkisi arasındaki doğrudan ilişkiye dayanarak tüm vücut insülin duyarlılığındaki farkların ölçülmesine olanak tanır. Bu tekniğin, kuyruk kesme gibi mevcut kan alma yöntemlerine göre temel avantajı, cerrahi olarak implante edilen arteriyel kateterin fareye vasküler erişim sağlayarak fareyi tutmak zorunda kalmadan kan örnekleri almamıza imkan vermesidir.Bu sayede, stres altında olmayan ve kısıtlanmamış farelerle bu deneyleri gerçekleştirmemiz mümkün olur. Arter kateteri, PE 10 tüpünün eğimli bir parçasının, PE 10'un selden 0,9 cm dışarı çıkacak şekilde altı santimetrelik bir astik tüp parçasına yerleştirilmesiyle hazırlanır. Venöz kateter ise yakalı altı santimetrelik bir SEL tüp parçasıdır.Masa, üç santimetrelik PE 20 parçalarının, yaklaşık 120 derecelik bir açıyla, iki adet 1,3 santimetrelik 25 gauge paslanmaz çelik konnektöre yerleştirilmesiyle oluşturulur. Bunlar, burada gösterildiği gibi bir miktar medikal silikon yapıştırıcıya yerleştirilir. Kateter implantasyonuna başlamak için, steril teknik kullanarak anestezize edilmiş bir fareyi temiz bir çalışma yüzeyine yerleştirin. Orta hattın beş milimetre sağına bir insizyon yapın.Sağ juguler veni izole edin. Sefalik ucu ipek sütur ile dikkatlice bağlayın ve kodal uca başka bir sütur parçasıyla gevşek bir düğüm atın. Ardından, yaylı makasla sefalik ligatürün hemen altından kesin ve kateteri tutucu boncuğa kadar yerleştirin.Boncuğun arkasına bir sütür bağlayın ve kateterin serbest ucunu bir örnekleme şırıngasına bağlayarak kateterin örnekleme yaptığını doğrulayın. Arteriyel kateteri yerleştirmek için, sternumun beş milimetre soluna ve ilk insizyonun kefealik kısmına küçük bir insizyon yapın. Sol karotis arterini izole edin, ardından kefealik kısmı ligatörleyin.İpek sütür ile bitirin ve gevşek bir düğüm atın. Açığa çıkarılan damarın kranial ucuna başka bir sütür parçası yerleştirin. Ardından, damarın kaudal ucunu klempleyin.Ve ligatlı ucun hemen altından yaylı makasla kesin. Kateteri klempe kadar dikkatlice yerleştirin. Klembi dikkatle serbest bırakın ve kateteri Astic P eklemine kadar ilerletin.Bağlama iplerini katetere sıkıca bağlayın ve kateterin serbest ucunu bir örnekleme şırıngasına bağlayarak kateterin örnekleme yaptığını doğrulayın. Ardından, hayvanı ters çevirin ve kürek kemikleri arasında küçük bir insizyon yapın; 14 gauge bir iğneyi, öndeki insizyonlardan sırttaki bu insizyona doğru deri altından tünel açarak ilerletin. Kateterleri, farenin sırt kısmından dışarı çıkarmak için iğne aracılığıyla geçirin.Örnekleme erişimi veya masa için arteryel ve venöz kateterleri fare antenindeki uygun konnektörlere bağlayın. Ardından, masayı kürek kemikleri arasındaki insizyona yerleştirin. Her iki insizyonu da naylon sütür ile kapatın.Her iki kateterin açık olduğunu doğrulayın. Fareyi iyileşme için sıcak ve temiz bir kafese yerleştirin ve insülin klempten önce farenin en az beş gün boyunca iyileşmesine izin verin. Farelerde hiperinsülinemik öglisemik klembin uygulanmasındaki en zor adım, öglisemiyi korumaya çalışmaktır.Farelerin metabolizmaları çok hızlıdır ve glukoz seviyeleri deney süresince önemli ölçüde değişebilir. Bu durum, bir farenin glukoz seviyelerinin deney boyunca nasıl değişeceğine dair bir sezgi geliştirmek ve ardından glisemiyi sabit tutmak için glukoz infüzyon hızını nasıl ayarlayacağınızı öğrenmek adına biraz pratik yapmayı gerektirir. Standart bir klembin kurulumu burada gösterilmiştir.Üç adet infuse eight, glukoz, insülin ve yıkanmış eritrositler, bir döner ekleme (swivel) düzeneğine bağlı dört yollu bir konnektöre takılır ve farenin üzerine asılır. Döner ekleme düzeneğinin infüzyon portu venöz katetere bağlanır. Fareyi bağlamadan önce, tüm infuse eight hatlarını salin ile doldurun.Ardından, örnekleme hattını heparinli salinle doldurun. Temizleme şırıngasını uzaklaştırdıktan sonra, swivel'in üst kısmına heparinli salin içeren bir şırınga bağlı bırakın. Klemplleme işleminden beş ila altı saat önce fareleri açlığa bırakmaya başlayın.Açlığın üçüncü saatinde çalışmaya başlayın, fareyi tartın ve venöz ile arteryel kateterleri sırasıyla infüzyon ve örnekleme hatlarına bağlayın. Klembin başlamasından 15 dakika önce, el tipi bir glukometreye boş bir glukoz şeridi yerleştirin. Ardından, hattaki tüm salini uzaklaştırmak için temizleme şırıngasıyla yaklaşık 50 µL kan çekin ve temizleme şırıngasını ayırın.Glukoz şeridini tüpün ucunda oluşan kan damlasına değdirerek kan glukoz seviyesini ölçün. Ardından, örnekleme hattına küt uçlu iğneye sahip bir şırınga yerleştirin ve 50 µL kan çekin. Kanı EDTA kaplı bir tüpe aktarın ve bazal hormon ve metabolit ölçümleri için plazmayı toplamak amacıyla tüpü santrifüjleyin.Bu aşamada, temizleme şırıngasını tekrar yerleştirin ve pistonu geri çekin. Hava kabarcıklarını gidermek için, başlangıçta çekilen 50 µL kanı tekrar enjekte edin. Glukometreden okunan kan glukoz değerini not edin.10 dakika sonra, kan glukoz ölçümünü tekrarlamak için glukometre ve temizleme şırıngasını kullanın ve ardından başka bir plazma örneği elde etmek için 50 µL daha kan çekin. İkinci bazal ölçümler alındıktan sonra; glukoz, insülin ve salinle yıkanmış eritrosit infüzyon hatlarını dört yollu konnektöre kadar doldurun. Dört yollu konnektörü, döner infüzyon portuna bağlı olan tüplere bağlayın.Salin ile yıkanmış eritrositlerin infüzyonuyla başlayın. İnfüzyon hızını, çalışma süresi boyunca örneklenen toplam kan hacmini karşılayacak şekilde ayarlayın. Eritrosit infüzyonu fareye ulaştığında, insülin ve glikoz infüzyonlarına başlayın.Bu, sıfırıncı dakikadır. İnsülin, önceden belirlenmiş sabit bir hızda infüze edilir. Başlangıç glikoz infüzyon hızı, bazal kan glikoz seviyelerine ve önceki deneyimlere dayanarak tahmin edilir.Sonraki iki saat boyunca, glukometre ile kan glikoz değerlerini ölçün ve hedef glisemiyi korumak için glikoz infüzyon hızını ayarlayın. 10 dakikalık aralıklarla yeni glikoz değerlerini ve glikoz infüzyon hızlarını kaydedin; 100. ve 120. dakikalarda, plazma insülinin ve diğer hormonların veya metabolitlerin ölçümü için ek kan toplayın. Burada, klempleme prosedürü boyunca glikoz seviyelerinin zaman seyri görülmektedir ve bu, hem standart diyetle beslenen hem de yüksek yağlı diyetle beslenen farelerde gliseminin klempleme boyunca ne kadar iyi korunduğunu göstermektedir. Glikoz infüzyon hızının zaman seyri, glisemiyi korumak için gerekli hızın yüksek yağlı diyetle beslenen grupta anlamlı derecede daha düşük olduğunu göstermekte olup, bu durum tüm vücut insülin etkisinde bozulmaya işaret etmektedir.Hem açlık hem de klemps insulin seviyeleri yüksek yağlı beslenen grupta daha yüksektir, bu da insülin dirençli bir fenotipin varlığını daha da desteklemektedir. Bu farelerde, endojen glukoz görünme hızını tahmin etmek için tritiyumlu glukoz kullanılır. Endo a, hepatik glukoz üretiminin bir göstergesiyken, kontrol farelerinde insülin endo A'yı tamamen baskılar.Yüksek yağlı diyetle beslenen farelerde baskılanma bozulmuştur. Benzer şekilde, tüm vücut glikoz yok olma hızını tahmin etmek için TRID glikoz kullanılır. İnsülinin RD'yi stimüle etme yeteneği, yüksek yağlı diyetle beslenen farelerde zayıflamıştır.Karbon 14 içeren 2-deoksiglukoz, dokuya özgü glukoz alımının bir ölçüsü olan glukoz metabolik indeksi RG'yi değerlendirmek için kullanılır. Bu örnekte görüldüğü üzere, yüksek yağlı diyetle beslenen farelerde insülinle stimüle edilen iskelet kası glukoz alımı bozulmuştur. Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, arteriyel ve venöz kateterleri yerleştirmek için gereken mikrocerrahi konusunda zorluk yaşayacaklardır.Cerrahi işlem oldukça uzmanlaşmış beceriler gerektirmektedir ve hiperinsülinemik öglisemik klempe yönelik cerrahide oldukça mahir hale gelmek için birkaç ay boyunca sürekli uygulama yapılması gereklidir; buradaki zorluk, metabolizması çok yüksek olan bir hayvan modelinde öglisemi durumunu korumaya çalışmaktır.

hyperinsulinemic-euglycemic-clamps-in-conscious-unrestrained-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe insülin eylem değerlendirmesi için "altın standart". İnsülin, glukoz alımını teşvik sabit bir hızla doluyor. Bu düşüşün karşı aşılanmış eksojen glukoz miktarı insülin duyarlılığını göstermektedir. İşte prosedür bilinçli bir dizginlenmemiş sıçan yapılır.

Bilinçli Rat hiperinsülinemik öglisemik Kelepçe

Bu iletişim kuralı bir antagonisti, MetCCL5, bir mikro-ozmotik pompa beyin infüzyon sistemi kullanarak fare beyin içine sunarak Kemokin (C-C motifi) ligand 5 (CCL5) üzerindeki rolünü inceliyor. CCL5 faaliyet geçici bu inhibisyon sinyal, glukoz intoleransı ve periferik sistemik insülin duyarlılık için lider hipotalamik insülin kesildi.

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

Daha yüksek kan şekeri konsantrasyonu ile insülin salınımını ölçmek için bir hiperglisemik kelepçe kullanılır. Hipoglisemik bir kelepçe, karşı düzenleyici yanıtların neden olduğu glikoz üretimini ölçmek içindir. Her iki yöntemde de aynı cerrahi prosedür kullanılır. Burada, sistemik glukoz metabolizmasını değerlendirmek için bir klemp tekniği sunuyoruz.

Bilinçli Farelerde Hiperglisemik Kelepçe ve Hipoglisemik Kelepçe

Burada, olası karışıklıkların azaltılması ile endokrin pankreas fonksiyonunu değerlendirmek için ek bir teknik olarak, sağlam bir pankreas ile fare damar sistemi yoluyla perfüzyon yoluyla glikoz ile uyarılan insülin sekresyonu (GSIS) gerçekleştirme hakkında ayrıntılar sunuyoruz.

Sağlam Bir Pankreas ile Farelerin Damar Sisteminden Perfüzyon Yoluyla Glikozla Uyarılan İnsülin Sekresyonu

Programlı elektrik stimülasyonu, kalp iletim özellikleri belirlemek için yeteneği ve çeşitli pacemaker protokolleri kullanarak kardiyak aritmiler neden ve sona erdirme imkanı sağlar. Transvenöz bir kateter yardımıyla, intrakardiyak elektrogram kayıtları, programlı elektrik stimülasyonu protokolleri aritmojenik substratlar tanımlamak için aşağıdaki farelerde elde edilebilir.

Farelerde Programlı Elektrik Stimülasyon

Transtorasik ekokardiyografide farelerde kalp fonksiyonunun değerlendirilmesi için noninvaziv bir yöntem sunmaktadır. Kalp ve intrakardiyak kan akımı, kalp sistolik ve diyastolik performans birlikte bir değerlendirme sağlamak boyutlu ölçümler elde etmek için kullanılan ultrason ve Doppler görüntüleme yöntemleri bir arada olabilir.

Fareler de Transtorasik Ekokardiyografi

Hemodinamiği ölçmek, sıvı sağlamak ve kan örneklemesi yapmak için vasküler erişimler, herhangi bir küçük hayvan modeli çalışması için önemlidir. Anestezi uygulanmış bir sıçanda monitörizasyon, infüzyon ve örnekleme yapmak üzere bir sisteme bağlanmak üzere karotis arter ve ortak juguler ven içine kateter implantasyonu için bir teknik sunuyoruz.

Karotis Arter ve Ven Juguler kateterizasyon bir Bilinçli Rat Modelinde, İnfüzyonları ve Kan Örnekleme hemodinamik Tedbirleri Gerçekleştirme

Bu yöntem, fare modellerinde yeni ilaçların farmakokinetiğini değerlendirmek için, karotid arter yoluyla sabit bir ilaç çözeltisi sunmak amacı ile geliştirilmiştir.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

Glomerüler filtrasyon hızının (GFR) belirlenmesi, genel böbrek fonksiyonunu değerlendirmek için altın standarttır. Bununla birlikte, bu parametreyi ölçmek için geleneksel prosedürler zahmetlidir ve büyük bir zaman yatırımı gerektirir. Burada, GFR'yi transkutanöz olarak belirlemek için daha hızlı ve minimal invaziv bir yöntem tanımlanmıştır.

Bilinçli Kemirgenler Böbrek Fonksiyon Transkutanöz Değerlendirmesi

İmzalat fareler fizyolojik olmayan sistemik kan basıncı, kan basıncı ve otonom sinir sistemi arasında yakın ilişki göz önüne alındığında otonomik sesi anlamlı değerlendirilmesi engellemektedir sergi. Böylece, aynı anda kayıt böbrek sempatik sinir etkinliği ve bilinçli farelerde intravenöz infüzyon ile kan basıncı için bir roman yöntemi gösterilmiştir.

Böbrek sempatik sinir etkinliği ve kan basıncı bilinçli, intravenöz infüzyon ile aynı anda kayıt için yeni yaklaşımın kontrolsüz fareler.

Öğrenin hiperinsülinemik-öglisemik kelepçe yöntemiyle farelerde insülin duyarlılığını değerlendirmeyi. Bu teknik, bilinçli ve serbest farelerde stresi en aza indirerek metabolik araştırmalarda doğru veri sağlar.

Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Daha fazla video keşfet