Duyusal Akson Rejenerasyonunu Teşvik Etmek için Fare Dorsal Kök Gangliyonlarının Elektroporasyon Aracılı Transfeksiyonu

Duyusal nöron hücre gövdeleri içeren açıkta kalan L4 ve L5 dorsal kök gangliyonlarına sahip anestezi uygulanmış bir fare alın.

Akson rejenerasyonunu düzenleyen florofor etiketli RNA yapılarına ve bir izleyici boyaya sahip bir mikroenjeksiyon pipeti yükleyin.

Karışımı DRG'lere enjekte edin.

Elektroporasyon elektrotlarını kullanarak DRG'lere elektrik darbeleri uygulayın.

Bu, duyusal nöron hücre gövdelerinin zarlarını bozar, yapıların sitoplazmaya girmesine izin veren gözenekler oluşturur ve transfeksiyonu kolaylaştırır.

Kesiği dikin ve farenin iyileşmesine izin verin.

Birkaç gün sonra, fareyi yeniden uyuşturun ve sabitleyin.

Soldaki orta hattın yanal bir kesi yapın. Siyatik siniri ortaya çıkarmak için kasları inceleyin.

Duyusal nöron aksonlarına zarar vermek için siniri ezin. Siteyi bir dikiş düğümü ile işaretleyin.

Kesiği dikin ve farenin iyileşmesine izin verin.

Transfekte edilmiş yapılar, DRG duyusal nöron hücre gövdelerindeki hedef mRNA'ları hedef alır ve yaralanma sonrası duyusal akson rejenerasyonunu artırmak için protein üretimini geçici olarak modüle eder.

DRG enjeksiyonu için, DNA plazmitlerini veya RNA oligolarını cam kılcal pipete yükleyin. Ardından kılcal cam pipetin ucunu dikkatlice DRG'ye yerleştirin. Ve hücre içi mikroenjeksiyon dağıtım sistemini kullanarak kademeli olarak 1 mikrolitre DNA plazmidleri veya RNA oligoları çözeltisi enjekte edin.

Elektroporasyon için, hedef DRG'yi elektrotlarla nazikçe sıkıştırın ve elektroporasyon sistemi ile 5 kare elektrik darbeleri uygulayın. Daha sonra kası, ardından cilt katmanlarını naylon dikişlerle kapatın. DRG elektroporasyonundan iki veya üç gün sonra, fareyi intraperitoneal olarak uyuşturun, uzuvlarını mantar pano üzerine bantlayın ve orta hat boyunca sol tarafa 0,5 santimetre 1 santimetre kesi yapın.

Ardından, gluteus maximus kası ve piriformis kası gibi kasları uzunlamasına kesin. Daha sonra siyatik sinirin daha büyük siyatik foramen ile siyatik çentik arasındaki segmentini ortaya çıkarın. Siniri mikrocerrahi forseps ile 12 saniye boyunca ezin ve ezilme bölgesini naylon epinöral sütür ile işaretleyin. Daha sonra kas ve cilt tabakalarını naylon dikiş ile kapatın.