JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 3:33 dk • June 17th, 2025
Bir şırıngayı adeno ile ilişkili virüsler veya AAV ve lokal anestezik olan lidokain içeren bir çözelti ile doldurun.
Uyanık bir fareyi yüzüstü pozisyona getirin ve üst gövdesini örtün.
Farenin pelvik kuşağını tutun ve cildi ortaya çıkarmak için alt sırtını tıraş edin. İyot ve etanol ile sterilize edin.
Alt omurgadaki boşluğu bulun ve işaretlemek için hafifçe bastırın.
Omurgayı hizalamak için kuyruğu döndürün ve şırıngayı dikey olarak yerleştirin.
Beyin omurilik sıvısının veya BOS'un aktığı intratekal boşluğa iğne girişini onaylayan bir kuyruk hareketi oluşana kadar açıyı ayarlayın.
Eşit dağılım için çözeltiyi yavaşça enjekte edin.
Viral parçacıklar nöronlara bağlanır, içeri girer ve genetik materyallerini çekirdeğe bırakarak hedeflenen gen ekspresyonunu sağlar.
Lidokain, sinir sinyallerini geçici olarak bloke ederek kısa süreli bacak felcine neden olur ve BOS'ta başarılı doğumu doğrular.
Bu protokol, intratekal iletimi CNS hastalıklarının tedavisinde etkili bir yöntem olarak belirler.
Prosedüre başlamadan önce, 25 mikrolitrelik bir Hamilton şırıngaya 27 gauge iğne takın ve iğnenin eğimli ucunu şırınga üzerindeki hacimsel ölçekle hizalayın, ardından 8 mikrolitre 4 çarpı 10 ila 10. genom kopyalarını dikkatlice yükleyin virüs çözeltisinin 10. genom kopyaları, kabarcıkları önlemek için şırıngaya.
Daha sonra, 30 ila 70 günlük, 12 ila 30 gramlık uyanık bir fareyi, biyogüvenlik başlığında yüzüstü pozisyonda bir yatak parçasının üzerine yerleştirin ve fareyi sakinleştirmek ve ısırılmasını önlemek için üst gövdeyi steril gazlı bezle örtün. Fareyi pelvik kuşağı üzerinde, bir tarafta başparmak ve diğer tarafta işaret parmağı ve orta parmak ile sıkıca kavrayın, iki taraflı pelvik kuşaklar arasındaki cildi başparmak ve işaret parmağı ile gergin tutun, ardından iki taraflı pelvik kuşaklar arasındaki kürkü tıraş edin ve maruz kalan cildi iyodür bazlı bir ovma ve% 70 etanol ile sterilize edin.
Adeno ile ilişkili virüs çözeltisinin doğrudan intratekal iletimi için, bilateral pelvik kuşaklar arasındaki orta hat boyunca intervertebral boşluğu palpe edin ve L5 ila L6 intervertebral boşluğu belirtmek için cilde bir girinti bastırmak için bir tırnak kullanın. Omurganın orta hattını ortaya çıkarmak için kuyruğun tabanını hafifçe ve nazikçe döndürün ve iğnenin eğimini hayvanın kafasına doğru ayarlayın. Fare yerine sıkıca sabitlenmişken, iğneyi omurganın orta hattı boyunca hizalayın ve şırıngayı merkezi bir sagital düzlemde tutarak iğneyi girintinin merkezine nazikçe ve dikey olarak yerleştirin.
İğne kemikle temas ettiğinde, açıyı yavaşça yaklaşık 30 dereceye düşürün ve iğneyi intervertebral boşluğa kaydırın. Ani bir kuyruk hareketi, intradural boşluğa başarılı bir girişin işaretidir. İğne intervertebral boşluğa girdiğinde, uç sıkıca kenetlenmiş hissedecektir. Vektör solüsyonunu enjekte edin ve iğneyi intradural boşlukta bir dakika tutun, ardından sızıntıyı en aza indirmek için iğneyi döndürerek yavaşça çekin.