JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:35 dk. • June 17th, 2025
Bir kültür kabı içindeki bir lamel üzerinde fare birincil astrositlerinin yapışık bir kültürüyle başlayın.
Astrositlere girmek için sağlam hücre zarlarını geçen bir floresan asidotropik prob ile inkübe edin.
Prob, asidik endolizozomal veziküllerin içinde seçici olarak birikir ve taşınmalarını izlemek için vezikülleri floresan olarak etiketler.
Fazla probu çıkarmak için yıkayın ve taze ortam ekleyin.
Kültürü konfokal bir mikroskop altına yerleştirin ve hızlandırılmış görüntüleme gerçekleştirmek için tek bir hücreye odaklanın.
Etiketli kargoyu perinükleer bölge, sitozol ve astrositik süreçler
içinde dağılmış floresan puncta olarak görselleştirin
.Üç boyutlu hücre hacmi boyunca kargoyu görselleştirmek için Z ekseni boyunca birden fazla odak düzlemi yakalayın.
Astrositler içinde çeşitli derinliklerde hücre içi kargo taşınmasını izlemek için belirli aralıklarla görüntüleme yapın.
Sabit kargo, hücre çevresine doğru hareket eden kargo ve çekirdeğe doğru hareket eden kargo arasında ayrım yapmak için kargo hareketini analiz edin.
Görüntülemeden 30 dakika önce, uygun bir lizozomal etiketleme probunu 200 mikrolitre astrosit kültür ortamında 1 mikromolar çalışma konsantrasyonuna seyreltin ve astrositl
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin