JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:28 dk. • June 17th, 2025
Beyin dokusuna implante edilmiş lusiferaz eksprese eden tümör hücreleri ile anestezi uygulanmış immünokompetan bir fare ile başlayın.
Fare ayrıca lusiferaz enzimi için bir substrat olan lusiferin ile uygulanır.
Lusiferin kan dolaşımında dolaşır, kan-beyin bariyerini geçer ve lusiferaz eksprese eden tümör hücrelerine ulaşır.
Lusiferaz eksprese eden tümör hücrelerinden gelen biyolüminesan sinyalleri ölçmek için görüntüleme sistemini parametrelerle kurun.
Anestezi uygulanmış fareyi biyolüminesans görüntüleme odasına yerleştirin ve görüntü elde edin.
Luciferin hücreye girer ve lusiferaz enzimi ile etkileşime girerek tümör hücresi sayısıyla orantılı bir biyolüminesan sinyali üretir.
Bir sinyal alanı tanımlamak ve biyolüminesan sinyali ölçmek için ilgi bölgesi aracını kullanın.
Tümör büyümesini değerlendirmek için, görüntülemeyi birkaç gün boyunca tekrarlayın ve aynı bölgeden gelen lüminesans sinyalini ölçün.
Zamanla, lusiferaz eksprese eden hücreler çoğalmaya başlar ve bir glioblastoma veya tümör oluşturur.
Lüminesans sinyallerindeki artış, glioblastoma büyümesini doğrular.
İntrakraniyal tümörün büyümesini görüntülemek için, önce görüntüleme istasyonunu az önce gösterildiği gibi başlatın.
Ardından, kuyruk tutamıyla uygun sedasyon seviyesini onayladıktan sonra, pozlama süresi için Otomatik'in seçilmesi dışında, görüntüleme sistemi parametrelerini az önce gösterildiği gibi ayarlayın. Görüntüleme sistemi hazır olduğunda, fareleri görüntüleme istasyonuna yerleştirin ve lusiferaz ifadesinin görüntülerini elde etmek için Al'ı seçin. Görüntü başarılı bir şekilde elde edildiğinde, araç paletinden ilgilenilen bölge aracını ve daire simgesinden Otomatik'i seçin.
İlgilenilen bölgeleri tanımlamak için sinyal alanlarını daire içine alın. Ve sonra bölgelerin ölçümlerini santimetre kare başına steradyan başına saniyede foton birimi olarak elde edin. Son olarak, fareleri görüntüleme odasından çıkarın ve tümör taşıyan hayvanları tamamen iyileşene kadar izleyin.