Bir fare beyni bölümündeki kan-beyin bariyerinin yüksek çözünürlüklü üç boyutlu konfokal görüntülemesi

Konfokal bir mikroskop yazılımıyla başlayın ve görüntü elde etme parametrelerini ayarlayın.

Ardından, bir cam slayt üzerine monte edilmiş bir fare beyni bölümünü alın. Bu bölüm kan-beyin bariyeri bileşenlerini hedef alan antikorlarla boyanır.

Kan-beyin bariyeri, homeostazı korumak için kan dolaşımı ve beyin arasında seçici bir hücresel arayüzdür.

Çözünürlüğü optimize etmek ve ışık kırılmasını en aza indirmek için lamel üzerine istenen kırılma indisine sahip bir damla daldırma yağı uygulayın.

Slaytı mikroskop tablasına yerleştirin ve numuneyi görselleştirmek için epifloresan lambayı kullanın.

Uygun filtreleri kullanarak, DAPI ile boyanmış çekirdekleri bulun ve görüntüleme için kılcal segmenti tanımlayın.

Canlı taramayı başlatın ve yüksek kaliteli görüntüler yakalamak için her floresan kanalının parametrelerini ayarlayın.

Son olarak, kan-beyin bariyerinin üç boyutlu bir görüntüsünü oluşturmak için Z-yığını alımının başlangıç ve bitiş noktalarını tanımlayın.

Yazılımın mikroskobu kontrol eden Edinme menüsünde, görüntü alma parametrelerini ayarlayın. Görüntü boyutu açılır menüsünde 1.024 x 1.024 piksel arasında bir değer seçin. Yakınlaştır menüsünün değerini ayarlayarak piksel boyutunu 200 ile