Peptit Kendi Kendine Montajını İncelemek için Bir Fourier Dönüşümü Kızılötesi Spektroskopi Tekniği

Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopisi - FTIR - peptitin kovalent olmayan etkileşimler tarafından bir arada tutulan supramoleküler yapılara kendi kendine montajını incelemeye yardımcı olur.

Birleştirilmemiş bir protein örneği alarak başlayın - beta tabakası açısından zengin bir supramoleküler yapı oluşturma yeteneğine sahip bir amiloid peptit süspansiyonu. Numuneyi bir ATR kristali ile donatılmış bir FTIR cihazına yerleştirin.

Kristal üzerine kritik bir açıyla bir kızılötesi ışın yönlendirin; ışın içinden geçer ve kristal ile numune arasındaki arayüze çarpar. Numuneden daha yüksek kırılma indisine sahip kristaller, ışının iç yansımasına neden olur.

Işının küçük bir kısmı, yansıma noktalarında duran bir dalga olan buharlaşan bir dalga olarak numuneye uzanır. Bu dalganın numune ile etkileşimi, dalganın enerjisinin emilmesine neden olur ve bu da bir dedektör tarafından kaydedilen yansıyan ışının zayıflamasına yol açar.

Peptitin yapısına bağlı olarak, numune kızılötesi spektrumun belirli bölgelerinde emilir. Sinyalin Fourier dönüşümü ile elde edilen absorpsiyon spektrumu, birleştirilmemiş protein örneğinin karakteristiği olan belirli bir dalga sayısında geniş bir tepe noktası gösterir.

Beta tabakası açısından zengin amiloid lifleri oluşturmak için kendi kendine montaja izin vererek numuneyi inkübe edin. Kuluçka sonrası, absorpsiyon spektrumunu kaydedin.

Önceki geniş tepe noktasından farklı bir dalga sayısındaki keskin bir tepe noktası, bir beta levha düzeneğine dönüşümü gösterir.

Kendi kendine montaj çözeltisi hazırlamak için, 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde% 20 asetonitril ve 10 milimolar HEPES karışımı içinde 1 miligram liyofilize peptit tozunu çözün. Ardından, montaj çözeltisini girdaplayın ve numuneyi oda sıcaklığında montaja bırakın.

Peptit düzeneği olgunlaşmaya ulaştığında, zayıflatılmış toplam yansıma elmas kristali üzerinde ince bir film olarak 8 ila 10 mikrolitre montaj çözeltisini kurutun ve kuru film oluştuğunda 1.640 ila 1.630 ters santimetre arasında büyük ve geniş bir su zirvesinin kaybolmasını izleyin.

1.500 ila 1.800 ters santimetre arasında arka plan ve kızılötesi spektrumlar elde edin, 50 ters santimetre çözünürlükte ortalama 2 tarama yapın ve her örnek taramasından önce arka plan taramalarını çıkarın.

Beta levha montajı için kızılötesi imza, 1.625 ila 1.635 ters santimetre arasında keskin bir tepe olarak gözlemlenmelidir.