JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:39 dk. • June 17th, 2025
Bir görüntüleme tamponu ile doldurulmuş bir görüntüleme odasında genetik olarak değiştirilmiş birincil nöronları içeren bir lamel alın.
Bu hücreler, mitokondriyal matriste floresan protein bazlı bir redoks indikatörünü eksprese eder.
Odayı bir floresan mikroskobu altında konumlandırın, hücreleri görünür ışık altında tanımlayın, ardından floresan görüntülemeye geçin.
Göstergeyi uyarmak ve floresan emisyonunu ölçmek için iki uyarma dalga boyu uygulayın.
Bu dalga boylarındaki floresan yoğunluk oranı, mitokondriyal oksidasyon durumunu yansıtır.
Hücresel NMDA reseptörlerini aktive etmek için NMDA'yı tanıtın, bu da hücre içi kalsiyum akışına neden olur.
Artış, mitokondriyal kalsiyum alımını tetikleyerek ROS üretimini ve mitokondriyal oksidasyonu indükler
.
ROS, göstergeyi oksitler, floresansını değiştirir ve sinyal oranını arttırır.
Sinyal oranını en üst düzeye çıkarmak için göstergeyi tamamen oksitlemek için oksitleyici maddeler ekleyin.
Tamponu çıkarın, ardından boyayı tamamen azaltmak ve sinyal oranını en aza indirmek için indirgeyici maddeler ekleyin.
NMDA kaynaklı mitokondriyal oksidasyonu kalibre etmek ve ölçmek için maksimum ve minimum sinyal oranlarını kullanın.
Canlı görüntüleme için hızla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin