JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:31 dk. • August 7th, 2025
Anestezi uygulanmış bir sıçan alın ve göz kayganlaştırıcı uygulayın.
Hedeflenen uzvu tıraş edin, cildi sterilize edin ve fareyi hedeflenen kasa en iyi erişimi sağlayacak şekilde konumlandırın.
Kası ortaya çıkarmak için cildi kaldırın ve kesin.
Motor nöron akson terminallerinin nöromüsküler kavşaklar oluşturmak için kas lifleriyle sinaps yaptığı bölgeler olan motor uç plakalarının veya MEP'lerin fotoğraflarına bakın.
MEP bölgesini zihinsel olarak açıkta kalan kas üzerine haritalayın.
Floresan izleyici içeren bir cam mikropipet alın.
İzleyiciyi MEP bölgesi boyunca birden fazla noktada kas içine enjekte edin.
Fazla izleyiciyi çıkarın, kesiği kapatın ve bir ağrı kesici uygulayın.
Enjeksiyon, nöromüsküler kavşaklarda izleyici kullanılabilirliğini artırarak akson terminallerinde endositozunu kolaylaştırır.
Veziküller içinde bulunan izleyiciler daha sonra geriye doğru omurilikteki motor nöron hücre gövdelerine taşınır.
Omurilikte izleyici işaretli motor nöronların varlığı, MEP hedefli uygulamanın nöroterapötik potansiyelini düşündürmektedir.
Canlı kası motor uç plakalarına enjekte etmek için, önce pistonlarla donatılmış dereceli cam mikropipetleri çekmek için bir mikropipet çektirmesi kullanın. Daha sonra, bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, mikropipetlerin uçlarını, her lümenin iç çapı yaklaşık 0,5 milimetre olacak şekilde bir çift forseps ile kırın. Ardından, çekilen pipetleri floro-altın ile doldurun.
Şimdi, anestezi uygulanmış bir hayvana göz kayganlaştırıcı uygulayın ve enjekte edilecek uzvu tıraş edin. Tıraşlı alanı üç alternatif klorheksidin ve% 70 alkol fırçasıyla silmek için gazlı bez kullanın. Ardından, hedeflenen kasa erişim sağlamak için hayvanı temiz bir alt ped üzerine yerleştirin. Hayvan pozisyondayken, hedeflenen kasın üzerindeki cildi alttaki kas sisteminden uzaklaştırmak için diş tutamaklı bir çift forseps kullanın ve ciltte bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın.
Kesinin, fasyada minimum bir bozulma ile ilgilenilen kası tamamen açığa çıkaracak kadar büyük olmasına dikkat edin. Daha sonra, ilgilenilen motor uç plaka bölgesinin konumunu ve şeklini zihinsel olarak kasın üzerine aktarmak için motor uç plakası fotoğraflarını kullanın ve motor uç plakası bölgesinin tam uzunluğu boyunca 3 ila 4 enjeksiyon, 1 ila 2 mikrolitre floro-altın uygulayın.
Son enjeksiyondan sonra, herhangi bir sızıntıyı gidermek için kasları nazikçe silin. Ardından, kesilen cildin iki ucunu birbirine yaklaştırmak için künt forseps kullanın. Yarayı cerrahi klipslerle kapatın ve uygun lokal anestezik ile yaranın tüm açıklığına sızın.