Lipozomal Kompleksler Kullanılarak Prion Protein Susturması için Nöronlara Hedeflenen siRNA Dağıtımı
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:57 dk. • June 18th, 2025
Nörodejeneratif prion hastalıklarıyla bağlantılı bir protein olan prion protein ekspresyonunu baskılayan küçük bir enterferans yapan RNA ile başlayın.
Katyonik bir lipozom süspansiyonu ekleyin.
Negatif yüklü siRNA, pozitif yüklü lipozom yüzeyine bağlanır.
Bir poliarginin kuyruğuna bağlı bir Kuduz Virüsü Glikoproteini olan RVG-9r peptidini tanıtın.
Arginin kalıntıları, RVG-9r-siRNA bağlanmasını kolaylaştırır.
Lipozom-siRNA-peptit komplekslerini anestezi uygulanmış bir farenin kuyruk damarına enjekte edin.
LSPC'ler kan dolaşımında dolaşır ve beyne ulaşır.
RVG-9r peptidi, endotel hücreleri üzerindeki nikotinik asetilkolin reseptörlerine bağlanarak kan-beyin bariyeri boyunca reseptör aracılı transsitozu tetikler.
Beynin içinde, RVG-9r nöronal asetilkolin reseptörlerine bağlanarak LSPC endositozunu ve siRNA salınımını kolaylaştırır.
RNA'nın neden olduğu susturma kompleksi siRNA'ya bağlanır.
Yolcu ipliği ayrışırken, kılavuz iplik PrP mRNA'ya bağlanır ve parçalanır, bu da translasyonu önler ve PrP ekspresyonunu azaltır.
20 mikrolitre 20 mikromolar stok siRNA çözeltisine 20 mikrolitre 4 nanomol lipozom süspansiyonu ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Daha sonra siRNA lipozom çözeltisi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin