JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:57 dk. • June 18th, 2025
Nörodejeneratif prion hastalıklarıyla bağlantılı bir protein olan prion protein ekspresyonunu baskılayan küçük bir enterferans yapan RNA ile başlayın.
Katyonik bir lipozom süspansiyonu ekleyin.
Negatif yüklü siRNA, pozitif yüklü lipozom yüzeyine bağlanır.
Bir poliarginin kuyruğuna bağlı bir Kuduz Virüsü Glikoproteini olan RVG-9r peptidini tanıtın.
Arginin kalıntıları, RVG-9r-siRNA bağlanmasını kolaylaştırır.
Lipozom-siRNA-peptit komplekslerini anestezi uygulanmış bir farenin kuyruk damarına enjekte edin.
LSPC'ler kan dolaşımında dolaşır ve beyne ulaşır.
RVG-9r peptidi, endotel hücreleri üzerindeki nikotinik asetilkolin reseptörlerine bağlanarak kan-beyin bariyeri boyunca reseptör aracılı transsitozu tetikler.
Beynin içinde, RVG-9r nöronal asetilkolin reseptörlerine bağlanarak LSPC endositozunu ve siRNA salınımını kolaylaştırır.
RNA'nın neden olduğu susturma kompleksi siRNA'ya bağlanır.
Yolcu ipliği ayrışırken, kılavuz iplik PrP mRNA'ya bağlanır ve parçalanır, bu da translasyonu önler ve PrP ekspresyonunu azaltır.
20 mikrolitre 20 mikromolar stok siRNA çözeltisine 20 mikrolitre 4 nanomol lipozom süspansiyonu ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Daha sonra siRNA lipozom çözeltisine 80 mikrolitre 500 mikromolar RVG-9r hedefleme peptidi ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin.
Oksijende% 2 ila 3 izofloran kullanarak bir fareyi uyuşturduktan sonra, farenin gözlerini oftalmik merhem ile kapatın ve bir ayak parmağını kıstırarak anesteziyi onaylayın. Sadece bir reaksiyon yoksa devam edin. Anesteziyi sürdürürken, kuyruk damarına erişmek için fareyi sırtına veya yanına yerleştirin.
Kuyruğu% 70 etanol ile silin ve ardından kuyruk damarına 300 mikrolitre LSPC veya PALET enjekte etmek için 26 gauge insülin şırıngası kullanın. Distal olarak enjekte etmeye başlayın ve damar çökerse veya yırtılırsa proksimal olarak hareket edin. Fareyi sternal yaslanma özelliğini koruyana kadar temiz bir kafese koyun.