Nöroterapötik Uygulamalar için Genetik Olarak Tasarlanmış Mezenkimal Kök Hücrelerin Karakterizasyonu

Transgenik fare mezenkimal kök hücreleri ile başlayın - kemik iliğinden türetilen multipotent hücreler

.

Hücreler, nöronal büyümeyi ve sağkalımı destekleyen GFP ve terapötik nörotrofik faktörleri ifade etmek üzere tasarlanmıştır.

Hücreleri tamponla yıkayın ve hücresel bütünlüğü korumak için sabitleyin.

Tampon ile tekrar yıkayın, daha sonra hücre ve nükleer zarları geçirgen hale getirmek ve spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmek için bir çözelti ekleyin.

Sadece bölünen hücrelerin çekirdeğinde eksprese edilen bir hücre proliferasyon belirteç proteinini hedefleyen birincil antikorları tanıtın.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.

Birincil antikorları hedefleyen florofor konjuge ikincil antikorlar ve çekirdekleri karşı boyamak için DNA bağlayıcı bir boya ekleyin.

Bağlanmamış reaktifleri çıkarmak için tampon ile yıkayın.

Plakayı yüksek içerikli tarama sistemine yükleyin ve floresan sinyalleri algılamak için görüntüler yakalayın.

Hücre proliferasyon belirtecinin ekspresyonu, aktif hücre bölünmesini gösterir ve transgenik hücrelerin nöroterapötik uygulamalar için uygunluğunu düşündürür.

Bir Ki-67 hücre proliferasyon testi yapmak için, hücre kültürlerini bir dakika boyu