İnsan Kaynaklı İnternöron Öncü Hücrelerinin Fare Yavrusu Hipokampusuna Nakli

Anestezi uygulanmış, genetiği değiştirilmiş bir fare yavrusunu, yaralanmayı önlemek için ters yönlü kulak çubukları kullanarak stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin.

Yavrunun hipokampüsü, inhibitör internöronları azaltmıştır ve bu da uyarıcı nöronların aşırı uyarılmasına yol açar.

Düz bir baş pozisyonunu koruyun ve anesteziyi uzatmak için yavruyu buzla örtün.

Kafatasını dezenfekte edin ve lambda süttürünü bir referans noktası olarak belirleyin.

Enjeksiyon iğnesini hedef hipokampal koordinatlara yerleştirin.

Bükülmüş bir iğne kullanarak, kafatası hasarını en aza indirirken bir mikro giriş deliği oluşturun.

İğneyi hedef derinliğe indirin ve insan kaynaklı internöron öncü hücrelerini kontrollü bir oranda enjekte ederek doku hasarını en aza indirin.

Hücre reflüsünü önlemek için iğneyi yavaşça geri çekin.

Yavruyu çerçeveden çıkarın, hareket devam edene kadar ısıtın, ardından kafesteki çöpe geri koyun.

Enjekte edilen öncü hücreler hipokampus boyunca dağılır, olgunlaşır ve nöronal ağa entegre olur. Zamanla, uyarıcı-inhibitör dengeyi geri kazandıran inhibitör iletimi arttırırlar.

Yavruyu stereotaksik çerçeveye yerleştirerek ve kulak çubuklarını ters yönde kullanarak konumlandırın. Daha sonra, etanole batırılmış yumuşak bir doku kullanarak cildin yüzeyini temizleyin. Lambda'yı tanımlayın ve stereotaksik aletin dijital ekran konsolunda koordinatları 0 olarak ayarlayın.

Hamilton şırıngasını istenen koordinatlara yerleştirdikten sonra, kafatasına nüfuz etmek için 90 derece bükülmüş bir insülin iğnesi kullanın ve küçük bir delik oluşturun. Ardından Hamilton şırıngasını iğne kafatasını geçene kadar aşağı indirin ve dorsoventral koordinatı 0 yapın.

İstenilen dorsoventral koordinatlar elde edilene kadar iğneyi indirin. Kök hücreler enjekte edildikten sonra iğneyi yavaşça geri çekin. Anneye geri vermeden önce yavruyu hareket etmeye başlayana kadar elinizle ısıtarak işlemi sonlandırın.