JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:44 dk. • August 7th, 2025
Kısıtlanmış bir Spinal ve bulbar kas atrofisi veya SBMA'dan etkilenen fare ile başlayın.
Kuyruğunu temizleyin ve damarı genişletmek için ısıtın.
SBMA, mutasyona uğramış bir androjen reseptörü veya mutant AR mRNA üreten AR geninden kaynaklanır.
Bu mRNA, motor nöronlarda sinyal iletimini bozan ve kas güçsüzlüğüne neden olan toksik proteinleri sentezler.
Daha sonra, terapötik mikroRNA'yı kodlayan bir plazmit ile rekombinant adeno ilişkili virüs veya AAV vektörleri içeren bir şırınga alın.
İğneyi kuyruk damarına sokun ve çözeltiyi enjekte edin.
Şimdi, kanamayı durdurmak için baskı uygulayın, ardından fareyi kafesine geri koyun.
Dolaşıma girdikten sonra, viral vektör kas fonksiyonunu kontrol eden motor nöronlara ulaşır.
Virüs hücreye endositoz yoluyla girer ve plazmidi serbest bırakır.
Plazmit, mutant AR mRNA'ya tamamlayıcı dizilere sahip olgun mikroRNA üretir.
Bu mikroRNA'lar AR mRNA'lara bağlanarak bozulmalarını tetikler.
Bu, toksik protein birikimini engeller ve nöromüsküler fonksiyonun iyileştirilmesine yardımcı olur.
AAV mikroRNA plazmit stoğunu, mililitre başına 10 ila 100 trilyon genomluk bir viral yük içeren 100 ila 200 mikrolitrelik alikotlara bölün. Ardından, bir şırıngaya bir alikot yükleyin ve 27 ila 30 gauge bir iğne takın.
Şimdi, standart bir fare tutucu kullanarak, kuyruğu açıkta kalacak şekilde bir fareyi sabitleyin. Daha sonra kuyruğu% 70 alkolle temizleyin ve vazodilatasyonu artırmak için kuyruğun altına yaklaşık 30 saniye ılık bir ped yerleştirin. Şimdi, kuyruğun distal kısmında, iğneyi eğim yukarı ve sığ bir açıyla, yaklaşık 15 derece olacak şekilde kuyruk damarına sokun.
Ardından virüsü enjekte edin ve iğneyi çıkarmadan önce birkaç saniye bekleyin. İğneyi çıkardıktan sonra, herhangi bir kanamayı durdurmak için iki parmağınızı kullanarak orta derecede basınç uygulayın. Sonra hayvanı ev kafesine geri koyun.