JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 3:58 dk • August 7th, 2025
Torasik seviyeler T7'den T9'a kadar eksize edilen spinöz süreçler ve laminalar ile açıkta kalan omurları olan anestezi uygulanmış bir sıçan alın.
Sırt ve ventral kökleri T8'in üstünde ve altında kesin.
Kanamayı durdurmaya yardımcı olmak için tuzlu su uygulayın ve bir sünger kullanarak sıvıyı çıkarın.
Sinir liflerini koparmak için omuriliği T8 ve T9 arasında kesin.
Sıkıştırılmış köpüğü boşluğa yerleştirin ve tuzlu su uygulayın.
Kanama durduğunda köpüğü çıkarın ve kalan sıvıyı temizleyin.
Önceden hazırlanmış bir piezoelektrik polimer kanalı, pencereleri açık, rostral omurilik kütüğünün üzerine kaydırın.
Kuyruk kütüğünü kanalın karşı ucuna yerleştirin.
Enjekte edilebilir bir matris içinde süspanse edilen Schwann hücrelerini kanal pencerelerinden enjekte edin.
Pencereleri güvenli bir şekilde kapatın.
Schwann hücreleri kanalı doldurur ve akson büyümesini destekleyen nörotrofik faktörleri salgılar.
Kanal yapısal rehberlik sağlarken, piezoelektrik özellikleri nörit büyümesi için biyoelektrik ipuçları üretir.
Yavaş yavaş, aksonlar köprü boyunca yenilenir ve kütükler arasındaki sürekliliği yeniden sağlar.
Tüm laminalar çıkarıldığında, enine süreçler arasındaki boşlukların, özellikle T8'de görünür olduğunu onaylayın ve dışa doğru çıkıntı yapan kemik parçaları olmadığını doğrulamak için T7 ve T9 arasındaki her iki taraftaki kemikleri inceleyin ve sırt kökleri görünür hale gelmelidir. Açılı yaylı makas kullanarak, sırt ve ventral kökleri T8'in üstünde ve altında kesin. Ve kanamayı durdurmaya yardımcı olmak için omuriliğe tuzlu su ekleyin.
Daha sonra, açılı yaylı makası omuriliğin üzerine, T8'deki enine süreçler arasındaki boşluklara yerleştirin ve sinir dokusunu tamamen koparmak için bir kesi yapın. Elde edilen 2 ila 2,5 milimetrelik boşluğa küçük bir parça sıkıştırılmış köpük yerleştirin ve hemen alana tuzlu su ekleyin.
Kopan kordon kütüklerinin hemostaza ulaşmasını beklerken, absorpsiyon üçgenlerini ince, uzun parçalar halinde kesin ve PBS deposundan bir kanal çıkarın. Fazla PBS'yi çıkarmak için kanala birkaç üçgen yerleştirin ve önceden kesilmiş pencerelerin açık olduğunu onaylayın.
Daha sonra, ortamı bir GFP Schwann hücre peletinden çıkarın ve Schwann hücrelerini 10 mikrolitre soğuk DMEM / F-12 içinde yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonuna 10 mikrolitre soğuk enjekte edilebilir jel ekleyin ve tekrarlanan pipetleme ile iyice karıştırın. Ardından, hücre süspansiyonunu buzun üzerine yerleştirin. Kordon kütükleri hazır olduğunda, sıkıştırılmış köpüğü çıkarın ve ardından laminektomi alanından salin ve kanı çıkarmak için uzun emme üçgenleri kullanın.
Ardından, rostral kütüğü nazikçe kaldırmak için bir mikro spatula kullanın ve kanalı, pencereler yukarı bakacak şekilde kütüğün üzerinden kaydırın. Kütüğün tamamının yerleştirilmesine ve kanal içinde fazla kanama olmamasına dikkat edin. Kuyruk kütüğünü yavaşça kaldırın ve kanalın diğer ucunu üzerine kaydırın. Tüm kütüğün yerleştirilmesine ve pencerelerin sırt yüzeyinde olmasına dikkat edin.
Ardından, önceden kesilmiş pencerelerden birinden kanala 20 mikrolitre GFP Schwann hücresi enjekte edilebilir matris karışımını enjekte etmek için Western blot yükleme ucu ile donatılmış bir mikropipet kullanın. Ve pencereleri kapatın.