JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:11 dk • August 7th, 2025
Lipid bazlı hücre dışı nanoveziküller olan eksozom süspansiyonu içeren bir tüp ile başlayın.
Düzgün eksozom dağılımı elde etmek için tüpe fosfat tamponlu salin veya PBS ekleyin.
Eksozom çözeltisini aspire edin ve artık kirleticileri gidermek için bir membran filtre kullanarak filtreleyin.
Bu filtrelenmiş eksozom süspansiyonunu yeni bir tüpe aktarın.
Eksozom süspansiyonuna nöroterapötik bir ajan olan dopamin ve ardından bir yüzey aktif madde olan saponin içeren bir çözelti ekleyin.
Ekzozomal membran geçirgenliğini arttırmak için karışımı fizyolojik sıcaklıkta inkübe edin.
Saponin, zara bağlı kolesterolleri eksozom zarından seçici olarak uzaklaştırır ve ekzozomal lipid çift katmanlarında gözenekler oluşturur.
Dopamin bu gözeneklerden eksozomlara yayılır.
Zamanla, ekzozomal zardaki lipitler yeniden dağılır ve gözenekler kapanır ve eksozomlar içindeki dopamini kapsüller.
Ardından, dopamin yüklü eksozomları peletlemek için karışım çözeltisini ultrasantrifüjleyin.
Serbest dopamin ve saponin içeren süpernatanı çıkarın.
Dopamin yüklü eksozomları içeren pelet daha ileri çalışmalar için hazırdır.
Daha önce ultrasantrifüjleme ile toplanan eksozom süspansiyonuna 3 mililitre PBS ekleyin ve seyreltilmiş süspansiyonu 0.22 mikronluk bir filtre kullanarak filtreleyerek sterilize edin.
Daha sonra 500 mikrolitre sterilize edilmiş eksozom süspansiyonunu başka bir tüpe aktarın.
Daha sonra, sterilize edilmiş süspansiyona sırayla mililitre dopamin çözeltisi ve saponin başına 500 mikrolitre 0.5 miligram ekleyin. İnkübasyondan sonra, süspansiyonu ultrasantrifüj edin.