JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:07 dk. • June 17th, 2025
Çok kuyulu bir plakanın kuyucuklarına yerleştirilen kimyasal olarak sabitlenmiş ve geçirgen murin kas lifleri ile başlayın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını en aza indirmek için bir bloke edici çözelti içinde inkübe edin.
Nöromüsküler kavşakta veya NMJ'de eksprese edilen presinaptik bir proteini hedefleyen birincil antikorlar ekleyin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.
Primer antikorları hedefleyen florofor konjuge ikincil antikorlar ve postsinaptik asetilkolin reseptörlerine bağlanan florofor konjuge bir nörotoksin ile inkübe edin.
Bağlanmamış reaktifleri çıkarmak için tampon ile yıkayın.
Elyafları montaj ortamı olan bir kızak üzerine yerleştirin, bir lamel yerleştirin ve elyafları düzleştirmek için silindirik mıknatıslarla sabitleyin.
Konfokal-STED mikroskobu kullanarak görüntülemeye başlayın.
Lazer aydınlatması üzerine, etiketli proteinler floresan yayılır.
Konfokal mikroskopi, sınırlı çözünürlüğü ve floresan yayılımı nedeniyle daha ince NMJ yapılarını net bir şekilde çözemez.
Buna karşılık, STED mikroskobu, floresan yayılımını bastırmak için bir tükenme lazeri kullanır ve net NMJ görselleştirmesine izin verir.
Ötenazi sonrası, iki ince tırtıklı forseps kullanara
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin