Name: Lignocellulosic Malzemeler için Yüksek verim Saccharification Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: Öğrenin, bitki biyokütlesi için yüksek verimli sakkarifikasyon testi yöntemini. Asit ön işlem, enzim hidrolizi ve MBTH yöntemiyle şeker miktarını belirleyerek biyoyakıt üretimi için genotipleri hızla tarayın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların Viksø-Nielsen (Novozymes) selülolitik enzimlerin hediye için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, 7.ÇP YENİLEME ve BBSRC projeleri BB/G016178 ve BB/G016194 tarafından finanse edildi.

1. Örneklerinin hazırlanması: Biz normalde otsu ve odunsu bitkilerin ya sapları ile çalışır. Otsu malzemelerin durumda biz olgunluk bitkiler büyümeye ve tohum oluşumu yaşlanması tamamlandıktan sonra sonra biz kuru sapları toplamak. Sapları 4 mm parça halinde doğranmış ve üç öğütme topları ile 2 ml flakon yerleştirilir. Odunsu bir malzeme söz konusu olduğunda, örneklerin bir ders ahşap dosya ile kaba talaş zemin ve daha sonra daha fazla işlem için bir bilyalı değirmen yerleştirilir. Örnekleri taşlama / istasyonu (Şekil 1) biçimlendirme içinde bir rafa yerleştirilir. Bu istasyon sırayla biler karışımları ve her bir örnek ağırlığındadır. Örnek başına gerekli tekrarlar, belirli bir parçacık boyutu için içsel değişkenlik belirlenir ön deneyler bir dizi zemin malzemesi test ederek kurulmuştur. 2 ml flakon altta deldi ve malzemeler seçilmiş iyi flakonun titreşim dağıtılmıştır. Titreşimli kol, toz doğru dağıtım için izin dengesi bir geri besleme tarafından kontrol edilir. Robot standart bir analiz / 4 mg yayar ve 4 tekrarlar durumlarda şartlarda ihtiyaç vardır. Bu 20 bitki örneklerinin / plaka analiz edilmesini sağlıyor. 2. Tedavi öncesi Numunelerin biçimlendirilmiş sonra, 96-iyi plakalar, otomatik bir sıvı taşıma sistemi (Şekil 2) tarafından işlenir. Burada hafif bir tedavi öncesi asit veya alkali çözeltiler 350 mcL ekleyerek ve uyarlanmış bir blok üzerine tabak ısıtma bitki materyali yapılır. Analizi sırasında buharlaşmasını önlemek için, 96 kuyucuğu bir silikon mat ile mühürlenir. Sıcaklığı ve süresi, tedavi öncesi çalışılan malzemeye göre değişiklik yapılabilir. Maksimum sıcaklık, ancak 100 ° C Sert ön işlemleri test etmek için alternatif bir prosedür, çizgi dışı malzemeler ön işlemden ve pretreatmet süreci ortadan kaldırmak için. 3. Hidroliz <ol><li> Malzemelerin ön tedavi edildikten sonra, robot, tedavi öncesi çözüm ve yıkar, tüm kuyuları, 5 kez 850 mcL 25 mM Asetat Tamponu otomatik olarak kaldırır. Çalkalama, tedavi öncesi bir çözüm tampon ekleyerek ve daha sonra örnek katıların yerleşmelerine izin verme sonra toplam hacminin% 50 kaldırarak tarafından yürütülmektedir. Aspirasyon yüksekliği iyi alt katıların aspire önlemek için sıvı kütlesinin yarısı; bu yaklaşımı kullanarak katıların ihmal kaybı. Bu yıkar sonra iyi pH 4.5 ve malzeme enzimatik hidroliz için hazırdır. </li><li> Sellülazlar ve hemicellulases bir çözüm içeren bir enzim karışımı robot tarafından eklenir. Her kuyuya, 850 mcL enzim karışımı sürülür ve 50 ° C sallayarak inkübatör plaka taşınır. Standart hidroliz 8 saat için yapılır, ama bu sefer Deneyin amacı adapte edilebilir. Otlar için kullanılan standart bir enzim yükleme malzeme 7 FPU / g. </li></ol> 4. Indirgen şeker tespiti Hidroliz sonra yayımlanan indirgen şeker tayini, modifiye edilmiş bir 3-metil-2-benzothiazolinone hydrozone (MTBH) yöntemi 3 kullanılarak gerçekleştirildi . Otomatikleştirmek için en kolay ve protein gibi bileşikler girişime en az hassas olması nedeniyle MBTH en uygun yöntem olarak seçilmiştir. , Doğru, biyokütle hidrolizatların konsantrasyonlarında şekerler ölçmek öyle ki, Biz standart bir optik 96 plaka için uygundur 250 mcL nihai hacmi ile robot platformu kullanmak için bu son derece duyarlı bir yöntem değiştirdi. Altındaki tüm adımları otomatik olarak yapılır ve her saccharification reaksiyon için indirgen şekerler üç bağımsız tespitler yapılmıştır. <ol><li> Hidrolizat 30 mcL derin kuyu plaka alınan ve 25 mM Sodyum Asetat tampon etekli PCR 96 plaka 45 mcL ile karıştırılır. </li><li> (25) 1N NaOH mcL ve 0.43 mg / ml MBTH ve 0.14 mg / ml DTT içeren bir çözüm 50 ul eklendi. </li><li> Karıştırıldıktan sonra, PCR plaka 60 ısıtılmış ° C 20 dakika 96 kuyulara tam olarak aynı miktarda ısı sağlayan bir PCR veya benzeri bir cihaz. </li><li> Ortaya çıkan reaksiyon optik plaka transfer edildi. </li><li> Oksitleyici reaktif (% 0.2 FeNH4 (SO4) 2,% 0.2 SÜLFAMİK asit ve% 0.1 HCI) 100 ul ekleyin. En az 1 saat süreyle iyice karıştırınız ve geliştirmek için bırakın </li><li> Her plakası da 50 nmol, 100 nmol ve 150 nmol glukoz standart reaksiyonlar içermelidir. Optik plakaları 620 nm'de okunur. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar: Şekil 3 ve 4 farklı türde analiz örnekleri sunulmaktadır. Otomatik platformu kullanarak tüm sonuçlar elde edildi. Şekil 3 tekrarselülolitik enzimlerin artan miktarlarda toprak kavak 8 saat inkubasyon tarafından yayımlanan indirgen şeker artış sunar. Şekil 4, asit ve alkali tedavi öncesi kavak numuneler üzerinde etkileri sunar. NaOH ön arıtma daha verimli olduğunu hidrolizi sırasında serbest bırakılması şekerler kolaylaştırmada seyreltilmiş H2SO4 tedavi öncesi. Hidroliz sonra ölçülen şekerlerin miktarı, tedavi öncesi 1M daha yüksek NaOH konsantrasyonları kullanılarak yapıldığında azalır. <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 öğütme ve biyokütle 96 iyi biçimlendirme Robotik istasyonu <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: Yüksek Verim saccharification analizi için sıvı taşıma istasyonu <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 kavak örnekleri şeker benzerleri azaltarak serbest bırakılması farklı bir enzim yükleri Etkisi <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> NaOH ön işlemleri aynı sıcaklıkta ve saatte asit ön arıtma daha sonra serbest H2SO4 farklı yüzdeler ile Pretreament 90 ° C de 30 dakika sonra serbest Şekil 4 saccharification kavak örneklerinin farklı ön işlemleri Etkisi A. Şeker B. Şeker .

<ol><li>Carpita, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+Biogenesis+of+the+Cell+Walls+of+Grasses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Physiol+Plant+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Structure and Biogenesis of the Cell Walls of Grasses.</a> Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol. 47, 445-476 (1996).</li>
<li>Gomez, L. D., Steele-King, C. G., McQueen-Mason, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustainable+liquid+biofuels+from+biomass%3A+the+writing%27s+on+the+walls%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Sustainable liquid biofuels from biomass: the writing's on the walls.</a> New Phytol. 178, 473-485 (2008).</li>
<li>Anthon, G. E., Barrett, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+reducing+sugars+with+3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Determination of reducing sugars with 3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone.</a> Anal Biochem. 305, 287-289 (2002).</li>
<li>Gomez, L. D., Whitehead, C., Barakate, A., Halpin, C., McQueen-Mason, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+saccharification+assay+for+determination+of+digestibility+in+plant+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Biofuels%22%5BJournal%5D)">Automated saccharification assay for determination of digestibility in plant materials.</a> Biotechnol Biofuels. 3, 23-23 (2010).</li>
</ol>

Standart sakkarifikasyon protokolünün varyasyonları; selülolitik enzimlerin aktivitesini belirlemek (örneğin, bir plakada kullanılan enzim konsantrasyonlarının değiştirilmesi veya substrat olarak kağıt kullanılması), belirli bir materyal üzerinde birkaç enzim karışımının verimliliğinin karşılaştırılması, sakkarifikasyonun zaman seyri vb. amaçlar için aynı platformda kullanılabilir.
Farklı bitki materyallerindeki sakkarifikasyon potansiyelini karşılaştırmak için kullanılan standart bir sakkarifikasyon protokolü, sekiz saatlik bir hidroliz içerir (Şekil 3 ve 4). Analiz edilen bitki materyallerinin çoğunun dört tekrar gerektirmesi nedeniyle, platform bu koşullar altında günde 80 örneği işleyebilir. Bu analiz; sakkarifikasyon potansiyelindeki değişkenliği ve bu potansiyelin belirlenmesinde rol oynayan genleri saptamak amacıyla geniş arpa, mısır ve brachypodium popülasyonlarının taranmasında kullanılmaktadır4.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Taşlama ve tartım robotu </td><td> Labman Otomasyon </td><td></td></tr><tr><td> Kapaklar ile 2 ml mikro tüp </td><td> Sarstedt Ltd </td><td> 72,694 </td></tr><tr><td> 5 mm paslanmaz çelik boncuk </td><td> Qiagen Ltd </td><td> 69989 </td></tr><tr><td> 1.2ml Abgene kare iyi depolama plakalar </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> TUL-050-050C </td></tr><tr><td> 96 kare kuyucuğu whatman kapağı mat </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> 7704-0104 </td></tr><tr><td> Sıvı hanling robot </td><td> Tecan Grup Ltd. </td><td> Özgürlük Evo 200 </td></tr><tr><td> Sülfürik asit </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> S/9231/PB17 </td></tr><tr><td> Sodyum hidroksit </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> BPE359-500 </td></tr><tr><td> Sodyum asetat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8750-500G </td></tr><tr><td> Asetik asit </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> A/0420/PB17 </td></tr><tr><td> Novozyme 188 </td><td> Novozyme </td><td> DCN00214 </td></tr><tr><td> Celluclast 1.5L </td><td> Novozyme </td><td> CCN03122 </td></tr><tr><td> 96 iyi PCR etek plakaları </td><td> Sarstedt Ltd </td><td> 72.1980.202 </td></tr><tr><td> D-glikoz </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> G/0450/53 </td></tr><tr><td> 3-Metil-2-benzothiazolinone Hidrazon hidroklorür hidrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 129.739-25G </td></tr><tr><td> DL-dithiothreitol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D9163-1G </td></tr><tr><td> Corning mikroplaka 96 sıra düz dipli </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> TKT-521-050H </td></tr><tr><td> Amonyum demir (III) sülfat dodekahidratı </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F1668-250G </td></tr><tr><td> SÜLFAMİK asit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 242.772-500G </td></tr><tr><td> Hidroklorik asit </td><td> Fisher Scientific Ltd. </td><td> 12462-0026 </td></tr></tbody></table>

lignocellulosic malzemeler için yüksek verim saccharification testi

High-throughput Saccharification Assay for Lignocellulosic Materials

Bitki lignocellulosic biyokütle makyaj polisakkaritler daha sonra bir biorefinery kurulmasında kullanılabilir şekerlerin bir dizi üretmek için ayrılabilir. Bu hammaddeler, mevcut fosil yakıt bağımlılığını yerine, sürdürülebilir ve karbon nötr bir yeni sanayi platformu, oluşturacaktır. Lignocellulosic malzemeleri gözlenen yapı sökümüne dinlemezlik bitki hücre duvarları çeşitli içsel özelliklerine göre üretilir. Kristal selüloz xylans ve arabinoxylans olarak matris polisakkaritler gömülü ve 1 sindirmek için de zor olan fenolik polimer lignin, tüm yapı kaplı. Saccharification 2 değişkenliği değerlendirmek için saccharification için hücre duvarlarının önemli darboğazlar ve aynı zamanda ekran mutant ve üreme nüfusu keşfetmek gerekir sindirilme bitki materyali geliştirmek için. Bu görevler, yüksek kapasiteli bir yaklaşım gerektirir ve burada 96-plaka formatında saccharification analizi gerçekleştirebilir analitik bir platform sunuyoruz. Bu platform, çeşitli bitki türlerinin büyük popülasyonlarının lignoselüloz sindirilme tarama izin vermek için geliştirilmiştir. Biz çok sayıda otomatik bir sistem hızla değerlendirilmelidir izin vermek için nazik hazırlama, kısmi enzimatik hidroliz ve şeker tayini için reaksiyon hacmi küçülttüm. Bu otomatik bir platform, tekrarlanabilir bir şekilde standartlaştırılmış bir parçacık boyutu bitki materyali azaltmak için kontrollü şartlar altında topu freze gerçekleştirirken miligram miktarda biyokütle ile çalışır. Zemin numuneleri sonra, otomatik biçimlendirme robot, 96 derin kuyu plaka (Şekil 1) karşılık gelen kuyu içine malzeme belirtilen ve kaydedilen miktarda dağıtır. Normalde 4 analiz için çoğaltır 4 kuyu içine aynı malzeme dağıtım. Plakalar istenilen düzende bitki materyali ile doldurulur sonra, bir sıvı taşıma istasyonu (Şekil 2) elle taşınır. Bu istasyondan numune seyreltik asit veya alkali ya da hafif bir tedavi öncesi tabi tutulur ve 90 ° C&#39;ye kadar sıcaklıklarda inkübe Tedavi öncesi çözüm daha sonra kaldırılır ve örnekleri için uygun pH hidroliz dönmek için tamponu ile durulanır. Örnekler daha sonra 50 değişken uzunlukta bir zaman için bir enzim karışımı ° C ile inkübe Bir kısım hidrolizat alınan ve indirgen şekerler MBTH kolorimetrik yöntemi ile otomatik olarak belirlenir.

Bitki biyokütle örnekleri çok sayıda saccharification potansiyeli belirlemek için basit ve hızlı bir yöntem açıklanmıştır. Bu analiz için otomatik bir platform 96 kuyucuğu ve yayımlanan şekerler hazırlama, hidroliz ve miktar daha sonraki performans analizi için bitki biyokütle hazırlık içerir.

Lignocellulosic Malzemeler için Yüksek verim Saccharification Testi

Bitki lignoselülozik biyokütlesini oluşturan polisakkaritler, daha sonra ... kurulumunda kullanılabilecek bir dizi şeker üretmek amacıyla parçalanabilir.

Merhaba, ben Kara Ted, ben Leo. Ben de buradayım. Ve ben de Simon McQueen Mason.Bitki biyokütlesinin sindirilebilirliği, günümüzde büyük ilgi gören bir konudur. Bunun nedeni, bu biyokütleyi oluşturan bitki hücre duvarlarının polisakkaritlerinde çok miktarda şekerin bağlı olmasıdır; eğer bu şekerleri kullanılabilir formda açığa çıkarabilirsek, bunları fermente ederek yakıtlar ve kimyasallar gibi her türlü ürünü üretebiliriz. Ne yazık ki, bu materyallerin sindirilmesi son derece zordur ve bu sindirilebilirliği nelerin kontrol ettiğine dair daha iyi bir anlayış geliştirmek aciliyet arz eden bir meseledir.Yenileme grubu üretimi için bitki materyallerini kullanabilmek adına, bu bitkilerdeki şekerleştirme potansiyelini ölçebilmemiz gerekir. Bu nedenle York Üniversitesi'nde, şekerleştirme potansiyellerini belirlemek amacıyla geniş bitki materyali popülasyonlarını tarıyoruz. Şekerleştirme, çeşitli endüstriyel süreçler aracılığıyla değerli kimyasallar üretmek için kompleks karbonhidratların monosakkarit bileşenlerine parçalanması işlemidir.Sakarifikasyon potansiyelini ölçmek için, açığa çıkan şekerleri belirlemek amacıyla biyokütleyi ön işleme ve enzim hidrolizine tabi tuttuğumuz endüstriyel süreçleri mikro ölçekli seviyede yeniden oluşturuyoruz. Bu işlem, genotiplerdeki ilgi çekici varyetelerin belirlenmesini sağlar. Yüksek verimli sistem, IG altı kuyucuklu plaka formatında çalışır.Genotipler arasındaki ince farkları ortaya çıkarmak için hafif hidroliz koşulları kullanılır; bu yaklaşım aynı zamanda farklı substrat materyallerini desteklemek ve farklı enzimleri değerlendirmek için yeterince esnektir. Kullandığımız yöntem, bitki materyalinin toz haline getirilmesini, ardından 90 °C'de 20 dakika boyunca seyreltilmiş bir asit veya alkali ile ön işlemden geçirilmesini içerir. Ardından, ticari bir sellülaz karışımı kullanılarak 50 °C'de sekiz saat boyunca enzim sindirimi gerçekleştirilir.Son olarak, indirgen şekerlerin salınımını belirlemek için bir MBTH yöntemi kullanılır. Bitki materyali, dört milimetrelik segmentler halinde kesilmiş kuru gövdeler olarak hasat edilir. Bunlar, üç adet beş milimetrelik metal bilye ile birlikte iki mililitrelik flakonlara yerleştirilir.Flakonlar, örneklerin izlenebilirliğini sağlamak amacıyla taranan barkodlarla tek tek etiketlenmiştir. Örnekler, robotlar içerisindeki öğütme ve formatlama robotlarına yüklenir. Biyokütlenin 96 kuyucuklu plakaya dağıtılmasına olanak tanımak için örnekler otomatik olarak öğütülür ve karıştırılır.Flakonlar delinir, ardından flakon, tozu dağıtmak için titreşen bir huninin içine yerleşecek şekilde robotik kolla yeniden konumlandırılır. Huninin titreşimi, kuyuk başına dağıtılan hedef kütle miktarını sağlamak için bir terazi tarafından düzenlenir. Biyokütle, plakaların 10 sütununa dağıtılır ve standartlar için iki sütun boş bırakılır.Örnek başına dört tekrar yaparak, plaka başına 20 örnek yüklüyoruz. Bu plakanın hidrolizatı PCR plakalarına üç kez bölünerek üç optik plaka elde edilir. Bu sayede, biyokütle kuyucuğu başına indirgen şekerler için üç belirleme yapmış oluruz.Formatlama işlemi tamamlandıktan sonra, buharlaşmayı önlemek için plakalar silikon bir mat ile kapatılır. Hazır hale geldiklerinde, sıvı aktarım robotuna aktarılırlar. Sıvı aktarım robotunda ön işlem, enzim hidrolizi ve açığa çıkan şekerlerin belirlenmesi işlemleri otomatik olarak gerçekleştirilir.İki metrelik masa, gerekli farklı reaktifler için kapların yanı sıra plastik malzemeler için saklama alanı içerir. Ön işlem ve hidroliz için inkübatörlerin yanı sıra şeker tayini için termosayklerler mevcuttur. Ön işlem, derin kuyucuklu plakada gerçekleştirilir.Biyokütle tozuna seyreltik asit veya alkali çözeltiler eklenerek gerçekleştirilir. Plakalar ısıtma bloğuna aktarılır ve 90 °C'de 20 dakika boyunca inkübe edilir. Bu inkübasyon tamamlandığında, ön işlem 500 µL asetat tamponu ile beş kez durulanarak uzaklaştırılır.Ön işlem durulandıktan sonra, bir enzim kokteyli eklenir. Bu standart bir karışımdır. Karışım, kuyuk başına 7 FPU konsantrasyonunda, dörtte bir oranında selüloz ve novozyme 1, 8 8 içerir.Plakalar, çalkalamalı inkübatörde 50 °C'de sekiz saat boyunca inkübe edilir. Elde edilen hidrolizattan 75 µL bir PCR plağına aktarılır. PCR plaklarının 11. ve 12. kolonlarına glikoz standartları eklenir.Ardından, tüm kuyucuklara 1 M sodyum hidroksitin 25 µL'si eklenir. Son olarak, PCR plakasına 50 µL MBTH reaktifi pipetlenir. Hidrolizatın üçüncü PCR plakasına aktarımı tamamlandıktan sonra derin kuyucuklu plaka saklanır.PCR plakaları, 60 °C'de 15 dakika inkübasyon için termosikletörlere aktarılır. Sürecin son adımı, renk oluşumu için reaksiyon karışımının optik plakalara aktarılmasıdır. İnkübasyonun ardından PCR plakaları termosikletörden çıkarılır.Aktarılan reaksiyon karışımına yüz mikrolitre yükseltgen reaktif eklenir. Renk gelişimini kolaylaştırmak için sıvı taşıma işlemi 24 saat içinde dört kez çalıştırılır; burada ön işlem durulaması ve enzim eklemesi yaklaşık iki saat sürer. Enzim hidrolizi sekiz saat, şeker tayini ise iki saat daha sürer.İlk plaka sekiz saat boyunca inkübe edilirken, bir sonraki plaka işleme başlar. Robot kaynaklarının bu şekilde tahsis edilmesiyle, salınan indirgen şeker miktarını belirlemek için günde 80 örnekten oluşan üç setlik bir verimlilik elde edilir. Optik plakalar 620 nanometrede okunur.Elde edilen sonuçlar, salınan şekerleri reaksiyon saati başına miligram başına nanomol cinsinden nicelleştirmek için analiz edilir. İzlediğiniz için teşekkürler; bunun biyoyakıtlar konusundaki araştırmalarınıza ilham vermesini dilerim.

high-throughput-saccharification-assay-for-lignocellulosic-materials

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bitki biyokütle, biyoyakıt üretimi için kullanılan olabilir önemli bir karbon-nötr yenilenebilir bir kaynaktır. Bitki biyokütle esas hücre duvarları, lignocellulosics olarak adlandırılan bir kompleks yapılara sahip kompozit malzemeden oluşmaktadır. Burada içerik ve duvar türetilen karbonhidrat bileşimi kapsamlı bir analiz için bir protokol.

Bitki Hücre Duvarları Kapsamlı Kompozisyonel Analiz (Lignocellulosic biyokütle) Bölüm II: Karbonhidratlar

Bu protokol, Escherichia coli olarak ifade metagenomic kütüphane selülolitik faaliyetleri için yüksek kapasiteli ekran açıklanmıştır. Ekran, çözüm odaklı ve yüksek otomasyonlu ve absorbans ölçümü gibi son okuma ile 384 iyi mikropleytin bir pot kimya kullanır.

Yüksek Verimli Ekran Metagenomic Kütüphaneler selülaz Aktivitesi Biomining

Biz mantar endoglucanase faaliyet için ekran için düşük maliyetli, yüksek verim yöntemi...

Mantar Endoglucanase Faaliyet Yüksek Verimli Tarama Escherichia coli</em

Bu videoda, çözünmeyen kromojenik biyokütle veya ICB kullanılarak bitki biyokütlesindeki kompleks polisakkaritlerin parçalanmasında etkili olan enzimlerin taranması için bir test gösterilmektedir. Enzimler, çözünür boyaya bağlı oligosakkaritleri serbest bırakmak için ICB'yi hidrolize eder ve enzim aktivitesi, reaksiyon ürününün kolorimetrik analizi ile değerlendirilir.

Çözünmeyen Kromojenik Biyokütle Bazlı Enzim Taraması: Bitki Biyokütlesini Parçalayan Enzimlerin Bozunma Aktivitesini Değerlendirmek İçin Bir Test

Endüstriyel atıklar, mikrobiyal büyümeyi analiz etmek için toplanabilir ve değiştirilebilir. Lignoselüloz ekstraksiyon teknikleri, spesifik biyolojik bozunma kabiliyetini analiz etmek için bileşenler sağlar. Gaz kromatografisi-kütle spektrometresi, hamur atıkları üzerinde yetiştirilen mikroorganizmaların fermantasyon ürünlerini tanımlar. Bu yöntemler, mikroorganizmaların hamur atıklarını parçalamak için metabolik kapasitesini belirler.

Selüloz Fabrikası Atık Akışlarında Mikrobiyal Büyümeyi Kolaylaştırma Yöntemleri ve Kültürlenmiş Mikropların Biyolojik Bozunma Potansiyelinin Karakterizasyonu

Bitki hücre duvarı yapısı ve kimyası özellikleri, biyoyakıtlar ve biyo-malzemeler için ideal hammaddeleri belirlemek için değerlendirilir. Standart yöntemlerin büyük veri kümelerine uygulandığında sınırlamaları vardır. Bu yüksek verimli ön arıtma, enzim sakarifikasyonu ve piroliz-moleküler ışın kütle spektrometresi yöntemleri, çok sayıda biyokütle örneğini düşük deney süresi ve maliyeti ile karşılaştırır.

Toplam Lignin, lignin Monomer ve enzimatik Şeker Yayın: Lignocellulosic Biyokütle rekalsitrantların Varyasyonları yüksek verimlilik Taraması

Küçük ölçekte mikrobiyal ekzopolisakkaritlerin tanımlanması ve karakterizasyonu için otomatikleştirilmiş modüler yüksek verimli bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, yeni izole edilen bakteri suşlarının veya tüm suş koleksiyonlarının hızlı bir şekilde taranmasını sağlamak için salgılanan polisakkaritlerin toplam miktarını ayrıntılı bir karbonhidrat parmak izi ile analiz etmek için hızlı bir ön seçimi birleştirir.

Otomatik Modüler Yüksek Verimli Ekzopolisakkarit Tarama Platformu Oldukça hassas Karbonhidrat Parmak İzi Analizi ile birleştiğinde

Adaptif gelişimi ve izolasyon teknikleri tarif hızla heksoz ve enzimin pentoz karışık şekerler undetoxified hidrolizatlarını şekerleştirilir ve 40 g / L etanol içinde birikir tüketmek mümkün Scheffersomyces stipitis suşunun türevleri NRRL-Y-7124 elde etmek üzere gösterilmektedir.

Etanol ile lignoselüloz biyo dönüşümünü için Sağlam Pentoz-fermente Maya Evrimi Teknikleri

Lignoselülozik biyokütlenin protik düşük maliyetli iyonik sıvılarla ön işlemi gösterilmiş, bu da delignifiye selüloz açısından zengin bir hamur ve saflaştırılmış bir lignin ile sonuçlanmıştır. Kağıt hamuru, enzimatik sakrifikasyondan sonra yüksek glikoz verimine yol açar.

Düşük maliyetli İyonik Sıvılar ile Lignoselülozik Biyokütle tedavi öncesi

Enzim taraması için yüksek verimli bir test tanımlanmıştır. Bu çoğullanmış kullanıma hazır tahlil kiti, önceden seçilmiş Chrömer, Polymer, Hydrogel (CPH) substratları ve kompleks I, çözünmez Chromojenik Biyokütle (ICB) substratlarından oluşur. Hedef enzimler polisakkarit parçalayıcı endo-enzimler ve proteazlardır.

Yeni çözünmez Kromojenik altyapı deneyiyle kitleri kullanılarak karbonhidrat parçalayıcı Enzimlerin yüksek verimli tarama

OrganoCat, lignoselülozun hafif koşullar altında lignin, fermente edilebilir şekerler ve selüloz hamuruna ön işlem ve fraksiyonasyonu için bir yöntemdir. Biyojenik, bifazik solvent su sisteminde ve katalizör olarak 2,5 furancarboxylic asitli 2-metiltetrahidrofuranda, OrganoCat ürünleri basit ürün geri kazanımı için yerinde ayrılır.

OrganoCat Prosesi kullanılarak Lignoselülozik Biyokütlenin Fraksiyonasyonu

Öğrenin, bitki biyokütlesi için yüksek verimli sakkarifikasyon testi yöntemini. Asit ön işlem, enzim hidrolizi ve MBTH yöntemiyle şeker miktarını belirleyerek biyoyakıt üretimi için genotipleri hızla tarayın.

Lignocellulosic Malzemeler için Yüksek verim Saccharification Testi

Daha fazla video keşfet