Floresan Makroskobu Kullanılarak Bir Fare Beyninde Beyin Omurilik Sıvısı Taşınmasının İn Vivo Görüntülenmesi

Bir floresan makroskop altına yerleştirilmiş, cerrahi olarak maruz kalan bir kafatasına sahip anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.

Kafa, kafatası üzerinde bir kafa plakası kullanılarak stabilize edilir ve bir kraniyal pencere oluşturulur.

Floresan izleyici içeren bir kanül, beynin cisterna magna'sına veya CM'sine yerleştirilir.

CM, beyni çevreleyen subaraknoid boşlukta dolaşan beyin omurilik sıvısı veya BOS için bir rezervuar görevi görür.

Görünür ışığı kullanarak kafatasına odaklanın.

Floresan izleyiciyi CM'ye enjekte edin, ardından floresan görüntülemeye geçin.

İzleyiciyi uyarmak için belirli bir dalga boyundaki ışığı kullanarak aydınlatın.

İzleyici bu ışığı emer ve floresan sinyalleri yayar.

Floresan izleyiciler BOS ile birlikte hareket ederek, subaraknoid boşluktan serebral arterleri çevreleyen perivasküler boşluklara ve beyin

dokusuna giren penetran arteriyollere

akışının görselleştirilmesini sağlar.

BOS akışını görselleştirmek için zaman içindeki floresan sinyalini yakalayın.

Makroskopa taşımak için fareyi ve kanüle bağlı infüzyon pompasını dikkatlice bir arabaya yerleştirin ve kafa tutucuyu makroskopun sahnesine yerleştirin. Şırınga pompasından Cisterna Magna Kanülü'ne giden hattın gergin olmadığından ve bükülme olmadığından emin olun. İyi bir oksijenasyonu doğrulamak için mukoza zarının solunum hızını ve pembe renklenmesini gözlemleyin.

Mikroskop kamerasını ve ışık yayan diyotu açın ve canlı modu başlatın. Görüntüleme alanının büyütme oranını, alanın üst kısmındaki nazofrontal sütür ve alt kısımdaki lambdoid sütür net bir şekilde görüntülenebilecek şekilde ayarlayın. Yerleştirildikten sonra, baş tutucuyu makroskop aşamasına bantlayın ve odak düzlemi, koronal sütürlerin arkasında, parietal kemiklerin yan taraflarına yerleştirilene kadar makroskopu açıkta kalan kafatasına odaklayın.

BOS izleyici infüzyonu için, infüzyon pompasını uygun hız ve hacme ayarlayın ve her kanal için izleyici için uygun uyarma dalga boyunu ve maruz kalma süresini ayarlayın. Ardından, izleyici infüzyonunu ve görüntülemeyi aynı anda başlatmadan önce makroskop üzerindeki tetikleme işlevinin doğru olup olmadığını kontrol edin.