JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:47 dk • August 7th, 2025
Medial genikülat çekirdeğin (MGN) nöronları ve lateral amigdala (LA) arasındaki sinapsları hedefleyen optik fiberlerle cerrahi olarak implante edilen bir sıçan ile başlayın.
Sıçan, işitsel ve görsel ipuçlarıyla ilişkili bir eylem olan bir kateter yoluyla narkotik almak için bir kola basmak üzere şartlandırılır.
Tekrarlanan koşullandırma sırasında, işitsel sinyaller MGN üzerinden geçer ve sinapslardaki nörotransmitter reseptörlerinin yukarı regülasyonunu indükleyerek sinaptik bağlantıları güçlendirir.
Viral olarak transdüksiyona uğrayan sıçan, MGN nöronlarında ışığa duyarlı iyon kanallarını eksprese eder.
Optogenetik stimülasyon adı verilen bir süreç olan bu kanalları açmak için optik fiberler aracılığıyla düşük frekanslı darbeler verin.
Ortaya çıkan katyon akışı, düşük frekanslı nörotransmitter salınımına neden olur.
Nörotransmiterler, LA nöronları üzerindeki reseptörlere bağlanır ve nörotransmitter reseptör içselleştirmesini indükleyen ve sinapsları zayıflatan düşük seviyeli bir kalsiyum akışını indükler.
Zayıflamış MGN-LA sinaptik iletimi, uzun süreli depresyon (LTD) olarak bilinen nöronal iletişimin azalmasına yol açar ve ipucu ile ilişkili narkotik arama davranışını azaltır.
Uzun süreli depresyon veya LTD'nin optogenetik indüksiyonu için, yama kablolarını temiz, standart bir kemirgen muhafaza kafesinin üzerinde asılı duran döner bağlantı aracılığıyla 473 nanometre mavi lazer diyota bağlayın. Lazeri çalıştırma talimatlarına göre açın ve lazeri bir darbe üretecine bağlayın. Fareye 1 Hertz'de 2 mikrosaniyede 900 ışık darbesi verecek şekilde ayarları yapın. Bir ışık sensörü kullanarak yama kablosundan geçen ışık çıkışını ölçün ve lazer yoğunluğunu, yama kablosundan geçen ışık çıkışı yaklaşık 5 ila 7 mw olacak şekilde ayarlayın.
Fareyi temiz muhafaza kafesine yerleştirin ve yüksükleri açığa çıkararak toz kapaklarını ve yüksük manşonlarını çıkarın. Ardından yama kablolarını her bir yüksüğe iki taraflı olarak bağlayın. Düzgün bir şekilde kurulursa, kemirgenler optogenetik stimülasyon sırasında kafes etrafında serbestçe hareket edebileceklerdir. Sıçanın çevreyi üç dakika boyunca keşfetmesine izin verdikten sonra, optogenetik stimülasyonu başlatmak için nabız üretecini açın. Uzun süreli depresyon indüksiyonunu takiben, farenin ev kafesine geri koymadan önce üç dakika kafeste kalmasına izin verin.